第4章 培养基、灭菌与除菌.docxVIP

第4章 培养基、灭菌与除菌 本章的主要内容： 1.培养基的制备 2.starch 的水解 3.培养基的灭菌 §4-1培养基的制备及要求 一、培养基用原材料及要求 微生物发酵领域其本质，也可以理解为物质形式的转化过程，就是利用微生物生长所需的底物转化成特定的产物，在这个过程中，有两个问题是工业化需要解决的：（1）产物的社会效益， （2）物质转变过程中产生的经济效益，即：低价值的原材料、低能耗等 对于特定的已知产物，在选择培养基原料时，则应注意以下几个原则： 1、培养基原材料的要求 （1）价格低廉，易得到（价格低，但不一定易得到，例如：地瓜干） （2）对微生物的生长繁殖和代谢无抑制作用的物质 （3）微生物的代谢产物无有害物质。 2、培养基用原材料的种类 碳源 starch 及其水解糖液 含有starch 及其水解产物的废弃物：味精废水、粉丝生产废水等 化工石油产品：醋酸、甲醇、乙醇、甲烷等 氨水、尿素（有脲酶的微生物），以流加形式使用 (NH4)2SO4、NH4NO3、NH4CL等 氮源 豆粕、玉米浆、酵母粉、酵母浸出物、鱼粉、 菌体蛋白？、 玉米蛋白粉等 二、培养基的种类 固体发酵 生产培养基 厌氧发酵 需氧发酵 按用途可分为：种子培养基 摇瓶培养基（优化工艺……） 检查培养基：HASS发酵用的检查培养基： 营养琼脂0.5%—0.55%、Sarch 2%，Glucose 0.5% 平板培养，根据透明圈的大小 本章涉及到的培养基为：生产使用的培养基 三、培养基的制备 1.培养基配制的原则 培养基制备是发酵成功与否的第一个要点，制备一个完整而科学的培养基是很重要的，也是非常艰巨的任务。通常制备培养基需要考虑以下几个方面的问题： （1）合适的C/N， 不同的微生物、同一种微生物不同的菌株，其对培养基中的C/N要求是不一样的，同一菌株在不同的发酵阶段，其对C/N的要求也不一样。 例如：黄源胶（Xanthan Gum发酵）：前期，较低的C/N，目的是强化菌体的生长和增殖：但是，在黄源胶的生物合成期，则需要较高的C/N，假如在这一时期，培养基中氮源仍然很高，其导致的发酵结果是，底物消耗了但产物的产率却很低。 在大多数情况下，C/N要求在0.2——2.0。对于一些特殊的情况，例如谷氨酸发酵，在谷氨酸生物合成期，则要求C/N为：100/15-21。 （2）在确定了C/N的前提下，需要研究的是不同的氮源，对发酵的影响。 虽然C/N确定，但是氮源的利用其本质就是：pr 肽 AA,通过AA而被利用，不同的氮源，其AA的组成与比例也不相同，对其发酵结果的影响也不相同。有人在HASS(高温淀粉酶)的发酵过程中，向培养基中添加某些AA（亮，异亮）则有利于高温淀粉酶的合成基因的表达，发酵液中的酶活力则明显得到提高。 （3）大多数的工业培养基都使用玉米浆。 玉米浆内含有VH，它是菌体生长和代谢的所必需的一种辅酶，通常玉米浆与： 菌体的增殖速度有关 与菌体细胞膜的合成有关，从而影响到细胞膜的通透性 对于某些菌体，与代谢途径和代谢机制有关。 （4）生长因子： 大多数菌体的生长因子如下： 维生素：大多数维生素是微生物生长的辅酶，需要量很小，1—50μg/L。 AA，凡是微生物自身不能合成的AA则必须以游离的AA或者小分子的肽提供，通常，以小分子的肽提供，微生物更易通过细胞膜进入菌体内部 ?，如果提供外援氨基酸，需要注意的是各种氨基酸的平衡。 嘌呤及其衍生物 2.培养基的优化方法 一种合成培养基的设计，需要考虑的因素是很多的，需要研究的成分也是很复杂的，其中包括碳源、氮源、玉米浆等，即便是碳源还可以是几种碳源的混合体，再加上述几种因素之间的相互影响，要确定一个科学的培养基配方是需要做大量的工作的，采用一个合理的数学方法，就可以在减少工作量的前提下，得到科学的结果。 介绍一种数学方法：均匀实验设计方法——旋转正交实验方法. 这是在正交实验的基础上发展起来的一种对于多因素、多水平的一种实验设计方法。 参考文献：方开泰:均匀正交实验方法 雄宗贵:发酵工艺学原理 §4-2培养基用材料及处理 发酵培养基用原料是非常广泛的，许多原材料需要经过处理后方能够使用，特别是以淀粉质