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葡萄糖耐量的测定

葡萄糖耐量的测定 组员:吴雪 张沛露 李建勋 范鎏 万倩 葡萄糖的性质 物理性质: 1、旋光性 D-葡萄糖在20摄氏度光时的比旋光度数值为+52.2.    2、溶解度 在20摄氏度时单一的葡萄糖溶液最高浓度为50%。 3、甜度 a-D-葡萄糖的比甜度为0.7.    4、黏度 葡萄糖的黏度随着温度的升高而增大。 化学性质: (1)分子中的醛基,有还原性,能与银氨溶液反应:CH2OH-(CHOH)4-CHO+2[Ag(NH3)2]++2OH-==CH2OH-(CHOH)4-COONH4+2Ag↓+H2O+3NH3,被氧化成葡萄糖酸    三维模型 (2)醛基还能被还原为己六醇    (3)分子中有多个羟基,能与酸发生酯化反应    (4)葡萄糖在生物体内发生氧化反应,放出热量。   2、酶电极法   葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下催化β─D葡萄糖 (葡萄糖水溶液状态)氧化,生成D─葡萄糖酸─δ─内酯和过氧化氢。过氧化氢与过氧化氢型电极接触产生电流。该电流值与β─D─葡萄糖的浓度呈线性比例,在酶电极葡萄糖分析仪上直接显示葡萄糖含量。 3、GOD-POD法 实验原理 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase,POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 试剂与器材 5ml移液管、50ul或100ul微量可调式移液器、721E型分光光度计、1cm比色皿、37℃恒温水浴锅 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PH=7.0)、酶试剂、酚溶液、酶-酚混合试剂、12mmol/L苯甲酸钠溶液、葡萄糖标准储存液(100mmol/L)、葡萄糖标准工作液(5mmol/L) 实验步骤 二、口服葡萄糖耐量试验方法及正常值 1、受试者试验前1天晚餐后即不再进食(即空腹10-14h) 2、次晨空腹抽静脉血2ml,测定其血糖含量; 3、将75g葡萄糖溶于200-300ml温开水中,令受试者5min内服下,服糖后0.5h、1h、1.5h、2h各抽血一次,做血糖定量测定; 4、将各次测定结果与相应的时间制成糖耐量曲线图,以便进行分析。 若血糖测定不能立即进行,血标本应放在含有氟化钠的试管中,每mL全血可用氟化钠6mg。离心分离血浆,血浆可冰冻待测。   正常的血糖水平。空腹不超过6.0mmol/L,服75g葡萄糖0.5、1.5小时都不超过11.1mmol/L,2小时不超过7.8mmol/L。   葡萄糖耐量减低。应具备以下三条:即 ①空腹血糖<7.0mmol/L; ②OGTT中服糖2小时血糖>7.8mmol/L,低于11.1mmol/L; ③OGTT中,服糖后0.5、1、1.5小时三点中至少有一点血糖≥11.1mmol/L。 空腹血糖≥7.0mmol/L,临床已诊断糖尿病,则不再作OGTT 临床意义 生理性高血糖:可见摄入高糖食物后,或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 病理性高血糖 (1) 糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 (2) 内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。 (3) 颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 (4) 脱水引起的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 生理性低血糖 :见于饥饿和剧烈运动。 病理性低血糖:(特发性功能性低血糖最多 见,依次是药源性、肝源性、胰岛素瘤等) (1) 胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。 (2) 对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 (3) 严重肝病患者,由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 (1)葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约36%为α型,64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。新配制的葡萄糖标准液主要是α型,故须放置2h以上(最好过夜),待变旋平衡后方可应用。 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。 测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g,

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