章核酸化学材料.ppt

DNA变性后，将不同种类DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，若两种单链分子之间存在一定程度的碱基配对关系，在适宜的条件（温度及离子强度）下，就可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 杂化双链可在不同的DNA与DNA、DNA和RNA、RNA与RNA间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 核酸分子杂交的应用 研究DNA分子中某一种基因的位置 定两种核酸分子间的序列相似性 检测某些专一序列在待检样品中存在与否 是基因芯片技术的基础 第 五 节 核 酸 酶 Nuclease 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切割部位不同 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或3′→5′核酸外切酶。 参与DNA的合成与修复及RNA合成后的剪接等重要基因复制和基因表达过程 负责清除多余的、结构和功能异常的核酸，同时也可以清除侵入细胞的外源性核酸 在消化液中降解食物中的核酸以利吸收 体外重组DNA技术中的重要工具酶 生物体内的核酸酶负责细胞内外催化核酸的降解 核酸酶的功能 核酶的发现 核酶发现：1982年 美国 Thomas Cech 研究四膜虫rRNA自我剪接加拿大 Sidney Altman发现RNase P分子中有催化活性的RNA组分 核酶发现意义： 拓宽了生物催化剂领域 开创了RNA生物学功能的历史性新认识：RNA不仅具有储存和传递遗传信息的功能，而且还具有生物催化剂的功能，在一定程度上可以说，RNA一身兼有DNA和蛋白质两大类生物大分子的功能。 核 酶 催化性DNA (DNAzyme) 人工合成的寡聚脱氧核苷酸片段，也能序列特异性降解RNA。 催化性RNA (ribozyme) 作为序列特异性的核酸内切酶降解RNA。 * * * 三、DNA的功能 DNA的基本功能以基因的形式携带遗传信息，并作为基因复制和转录的模板。 它是生命遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。 基因从结构上定义，是指表达有功能的RNA和蛋白质的DNA分子中的特定区段，其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能。 第三节 RNA的结构与功能 Structure and Function of RNA RNA结构 为单链线性分子 常自身折叠形成发夹（hairpin）和茎环（stem-loop） RNA的种类、分布、功能 一 、信使RNA的结构与功能 hnRNA 内含子 (intron) mRNA * mRNA成熟过程 外显子 (exon) * mRNA结构特点 1. 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷（m7G），同时第一个核苷酸的C′2也甲基化，形成帽子结构：m7GpppNm。 2. 大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾。 帽子结构‘m7GpppNm’ mRNA由核内向胞质的转位 mRNA的稳定性维系 翻译起始的调控 帽子结构和多聚A尾的功能 mRNA的功能 按碱基互补配对原则，抄录DNA遗传信息并传送至核糖体，以决定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。 DNA mRNA 蛋白 转录 翻译 原核细胞 细胞质 细胞核 DNA 内含子 外显子 转录 转录后剪接 转运 mRNA hnRNA 翻译 蛋白 真核细胞 * tRNA的一级结构特点 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C 二、转运RNA的结构与功能 N,N二甲基鸟嘌呤 N6-异戊烯腺嘌呤 双氢尿嘧啶 4-巯尿嘧啶 稀有碱基 * tRNA的二级结构 ——三叶草形 氨基酸臂 DHU环 反密码环 额外环 TΨC环 氨基酸臂 额外环 * tRNA的三级结构 —— 倒L形 * tRNA的功能 活化、搬运氨基酸到核糖体，参与蛋白质的翻译。 * rRNA的结构 三、核蛋白体RNA的结构与功能 * rRNA的功能 参与组成核蛋白体，作为蛋白质生物合成的场所。 * rRNA的种类（根据沉降系数） 真核生物 5S rRNA 28S rRNA 5.8S rRNA 18S rRNA 原核生物 5S rRNA 23S rRNA 16S rRNA 原核生物 16SrRNA 3 ′端——ACCUCCU，识别结合mRNA