第五章灭菌和菌种保藏分析.pptVIP

Company name 2、沙土管保藏法 原理：造成干燥和寡营养的保藏条件 适用菌：产孢子的放线菌或形成芽孢的细菌 3、真空冷冻干燥保藏法 原理：创造干燥和低温的保存环境 基本方法：在较低的温度下快速将孢子或微生物冻结，保持菌种的细胞完整，然后在减压的情况下使水分升华，这样是细胞的生长代谢等生命活动处于停止状态，得以长期保藏 优点：保藏期长、变异小、适用范围广，是目前较理想的保藏方法，也是个保藏机构广泛采用的方法 Company name 四、菌种保藏的注意事项 1、菌种在保藏前所处的状态 绝大多数微生物的菌种均保藏其休眠体。 2、菌种保藏所用的基质 斜面低温保藏：碳源应少些、营养成分应贫乏 砂土管保藏：砂和土要充分洗净 冷冻干燥：应注意保护剂 3、操作过程对细胞结构的损害 * * * * Company LOGO 授课教师：唐小春 动物生物技术系 吉林大学畜牧兽医学院 污染杂菌的危害 1.消耗营养物质。 2.分泌抑制发酵生长的有害物质。 3.分泌严重改变培养液性质的物质。 4.分泌抑制产物生物合成的有毒副作用的物质。 5.产生破坏代谢产物的酶类。 轻者影响产量，重者导致全军覆没 要认真做好培养基、发酵设备、管道与附件的灭菌、空气除菌、严格控制生产操作 第一节　灭菌的基本原理 灭菌：是指用化学的或物理学的方法杀灭或除掉物料或设备中所有的有生命的有机体的技术或工艺过程。 工业中常用的灭菌方法： 　　化学物质灭菌、热灭菌（包括干热灭菌和湿热灭菌）、辐射灭菌和过滤介质除菌。 第一节　灭菌的基本原理 一、几种常用灭菌方法的基本原理 　(一)化学物质灭菌 　　 甲醛、苯酚、高锰酸钾、洁尔灭、氯化汞、表面活性剂等 　　 与微生物细胞中某种化学成分反应，如使蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜通透性等。 　　 生产中使用的培养基里含有蛋白质等营养物质亦易于与上述化学物质发生化学反应，同时药物加入培养基之后很难除掉。 所以不能用于培养基的灭菌，只能用于空间、设备、和器械的消毒灭菌。 第一节　灭菌的基本原理 一、几种常用灭菌方法的基本原理 (二)辐射灭菌 是利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀灭微生物。 紫外线：有效波长2400-3000?，对微生物有高度致死效应，主要是与菌体核酸的光化学反应而造成菌体死亡。对营养细胞和芽孢均有效。但穿透力低，只适于表面灭菌。 X射线和γ射线:使菌体内的水和有机物产生强烈的离子化反应，阻碍微生物代谢活动而导致菌体迅速死亡。 虽然灭菌效果好，但穿透力强，不安全不经济。 第一节　灭菌的基本原理 一、几种常用灭菌方法的基本原理 　(三)干热灭菌 指在干燥高温条件下，微生物细胞内的各种与温度有关的氧化反应速度迅速增加，使微生物的致死率迅速增高的过程。 　　一般160℃，1小时。 　　主要用于需要保持干燥的器械、容器的灭菌。 第一节　灭菌的基本原理 一、几种常用灭菌方法的基本原理 　(四)湿热灭菌 　　 是直接蒸汽灭菌，蒸汽冷凝时释放大量潜热，并具有强大的穿透力，在高温和水存在时，微生物细胞中的蛋白质极易发生不可逆的凝固性变性，短时间内杀死微生物。 　　经济快速，被广泛应用与工业生产。 第一节　灭菌的基本原理 二、湿热灭菌的原理 　 大多数微生物最适温度为25~27℃,维持生命活动的温度为5~50℃，当温度超过最高限温时微生物就会发生死亡。 致死温度：杀死微生物的极限温度。 致死时间：在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间。 微生物的营养体、芽孢和孢子的结构不同，对热的抵抗力也不同。 　　无芽孢菌在60℃保温10min即可全部被杀死。 　　芽孢要在100℃下保温10min到几小时才能被杀死。 　　嗜热细菌在120℃下仍可耐受20~30min。 第一节　灭菌的基本原理 热阻：指微生物在某一种特定条件下（主要是温度和加热方式）的致死时间。 一般所指的灭菌是否彻底，是以能否杀死热阻大的芽孢杆菌为指标。 对数残留定律：微生物在灭菌过程中，是随时间逐渐死亡的，其减少速率(dN/dt)与一瞬间残留的菌数成正比。 第一节　灭菌的基本原理 实际设计时常用Nt＝0.001 即1000批次的灭菌中只有一 批失败。 相同条件下，不同微生物的K值是不同的，K值越小，热阻越大。 一、培养基的灭菌温度选择 用湿热灭菌方法对培养基灭菌时，加热的温度和时间对微生物死亡和营养成分均有破坏作用，因而选择一种既能达到灭菌要求又能减少营养成分被破坏的温度和受热时间，是研究培养基灭菌质量的重要内容。　 绝大多数培养基的营养成分的破坏和菌体死亡都属于一级分解反应。Arrhenius Equation: 第二节　培养基和发酵设备的灭菌