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 2017-5-20 杨媛媛 李亚萍 宁波大学应用固体化学研究中心 2015年11月 分子荧光光谱法Molecular fluorescence spectroscopy  2017-5-20 1.概述 2.荧光光谱法基本原理 及影响荧光强度的因素 3.荧光分析法的特点 4.荧光分光光度计 5.荧光分析法的应用 6.荧光测试 7.文献数据分析 8.论文撰写 目录 1.概述 2017-5-20 分子荧光光谱法(Molecular fluorescence spectroscopy )又称为荧光光谱法或荧光分析法．是以物质所发射的荧光强度与浓度之间的线性关系为依据进行的定量分析，以荧光光谱的形状和荧光峰对应的波长进行行的定性分析． 光致发光（Photoluminescence）:物体依赖外界光源进行照射，从而获得能量，产生激发导至发光的现象。它大致经过吸收、能量传递及光发射三个主要阶段，光的吸收及发射都发生于能级之间的跃迁，都经过激发态。而能量传递则是由于激发态的运动。紫外辐射、可见光及红外辐射均可引起光致发光。如磷光与荧光。 荧光：受光激发的分子从第一激发单重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。寿命为10-8 ~ 10 -11s。由于是相同多重态之间的跃迁，几率较大，速度大，速率常数kf为106~109s-1。 磷光：从第一激发三重态的最低振动能级回到基态所发出的辐射。由于磷光的产生伴随自旋多重态的改变，辐射速度远小于荧光，磷光寿命为10-4 ~10s。 2017-5-20 单重态： 一个分子中所有电子自旋都配对的电子状态。 三重态：有两个电子的自旋不配对而平行的状态。激发三重态能量较激发单重态低。 2017-5-20 2.荧光光谱法基本原理及影响荧光强度的因素 分子的激发与失活 （1）分子的激发 基态→激发态(S1、S2、激发态振动能级)：吸收特定频率的辐射，跃迁一次到位。 激发态→基态：多种途径和方式，速度最快、激发态寿命最短的占优势。 2017-5-20  （2）激发态分子的失活 激发态分子不稳定，它要以辐射或无辐射跃迁的方式回到基态。 2017-5-20  2017-5-20 无辐射跃迁 ☆振动弛豫：激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高。 ☆内转换：相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级回到低能级的分子内过程。 ☆系间窜越： 激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的过程。 ☆外转换：激发态分子与溶剂与其他溶质相互作用、能量转换而使荧光 （或磷光）减弱甚至消失的过程。荧光强度的减弱或消失，称为荧光熄灭（或猝灭）。 影响荧光强度的因素 一、分子结构 电子跃迁类型 * → 的荧光效率高，系间窜跃至三重态的的速率常数较小，有利于荧光的产生。 共轭效应 含有* → 跃迁能级的芳香族化合物的荧光最常见且最强。具有较大共轭体系或脂环羰基结构的脂肪族化合物也可能产生荧光 取代基效应：苯环上有吸电子基常常会妨碍荧光的产生；而给电子基会使荧光增强 刚性平面结构：刚性结构和共平面性可降低分子振动，减少分子与溶剂的相互作用，使外转换能量减少，有利于荧光的发射。 2017-5-20 二、环境因素 溶剂效应：一般荧光峰波长随着溶剂极性的增大而向长波方向移动。（极性溶剂，荧光物质与溶剂静电作用显著，从而稳定了激发态，使荧光波长发生红移，但有少数例外） 温度的影响：低温条件进行荧光测定，利于分析灵敏度。 pH的影响：对于含酸性或碱性基团的物质，pH对荧光发射产生较大的影响 溶解氧的存在往往使荧光强度降低。 2017-5-20  2017-5-20 ★灵敏度高。检测限比吸收光谱法低1~3个数量级； ★选择性比吸收光谱法好。因为能产生紫外可见吸收的分子不一定发射荧光或磷光； ★试样用量少和方法简便 ★能提供比;光多的物理参数 ★应用范围不如吸收光谱法广，因为有的分子不发荧光。 3.荧光分析法的特点 2017-5-20 4.荧光分光光度计 荧光分光光度计既可用于定量分析，也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。第一单色器选择激发光波长（＞250nm的紫外光），故称为激发单色器。第二单色器（荧光单色器）与激发光入射方向垂直，并选择荧光波长，可提高方法的选择性和准确度。 2017-5-20 5.荧光分析法的应用 荧光法灵敏度高、选择性好，可用于痕量分析，但是能发生荧光的化学体系不多，这是荧光法的应用特点。 无机物通过与荧光试剂作用生成荧光螯合物而进行荧光分析，非过渡金属离子的荧光螯合物较多，荧光试剂具有两个（或以上）与MZ+形成螯合物的电子给予体官能团的芳香结构。 2017-5-20 6.荧光测