遗传学第三章连锁互换和基因作图预案.ppt

（四）DNA介导的基因定位 1 克隆基因定位法 原理：采用已克隆基因的cDNA作探针，与杂种细胞中人染色体DNA进行分子杂交。 保留的人体染色体号数 1 2 3 4 5 6 7 8 杂种细胞克隆 A B C + + + + - - - - + + - - + + - - + - + - + - + - 2、 原位分子杂交法基因定位 目的基因DNA 重组DNA* + 早中期染色体 ? 变性 ? 复性 ? 干燥 ? 放射自显影 二、 人类染色体作图 人类基因组计划介绍（二） 人类基因组计划（HGP）的基本任务可以用4张图谱来概括：遗传图谱、物理图谱、序列图谱、基因图谱。 1、遗传图谱 遗传图谱也称遗传连锁图谱，构建遗传图谱的基本原理是真核生物遗传过程中会发生减数分裂，此过程中两条同源染色体要进行交换重组，重组百分率可以反映出染色体上两点之间相对距离，称遗传距离，单位为厘摩尔根（cM）。根据遗传距离,可以确定同一染色体上基因间的相互距离,绘制遗传图谱. * * 遗传标记 在基因定位时的作用。 不同基因 带有遗传标记的染色体 根据遗传标记，基因在染色体上的位置被确定。 2、物理图谱 基因组太大,必需分散测序 如果将每个碱基比作一个英文字母，以每10 cm书写60个字母计算，人类基因组30亿个碱基其长度可达5000千米，相当于从北美洲的蒙特利尔横跨大西洋到达伦敦，洛杉矶 到达巴拿马。以上述标准编写书籍，可写成3000本每册200万字的著作。 * 物理图谱的基本原理是将每一条染色体敲碎、分段克隆，利用重叠的方法将这些克隆头尾重叠相连，就可以获得横跨和覆盖整条染色体的克隆群。 物理图以Mb、kb、bp作为图距。 物理图谱的路标：STS(sequence-taged site)序列标签位点， STS在基因组中只出现一次，可定义重叠克隆群中某一特定克隆、对重叠克隆群进行排序。 * 能克隆大片段DNA载体如YAC（10Mb）等的出现，使克隆群排序变得容易、准确。 特定的大片段DNA克隆要进行再切割、构建重叠亚克隆群供测序使用。 * 3、序列图谱 遗传图、物理图都是为绘制序列图而建的，目前的测序技术还不允许很长链DNA直接测序。序列图谱分析基本策略是建立DNA小片段重叠群，STS被用作任何两个片段间的重叠区域，使分别被测的短序列进行正确的拼接。 * 4、基因图谱 在人类基因组中鉴别出占2%-5%的全部基因。 * 基因 增强子 组织特异性成分 “CCAAT盒” “TATA”盒 “帽子位点”转录起始位点 ATG起始密码子 GT AG GT AG TAA,TGA,TAG终止密码子 AATAAA多聚腺苷酸化信号 加(A)n位点 5‘ 非翻译区 3‘ 非翻译区 若两连锁基因在异臂上，则PD与NPD都由双交换形成且机会相等，所以PD=NPD。但事实上PD≠NPD故此情况不可能 ∴ nic和ade在同臂上 已知RF（0-nic)+ RF（nic-ade)=5.05%+ 5.2% RF（0-ade)=9.3% 即RF（0-nic)+ RF（nic-ade) ≠ RF（0-ade) 原因：着丝粒和ade间发生过双交换，但在计算 RF（0-ade)时却没有计算在内，而在计算RF（0-nic)和 RF（nic-ade)时都各计算一次。 校正着丝粒与 ade间的重组值 子 囊 型 每一子囊被计算为重组子的染色单体数 子 囊 数 在所有子囊中被计算为重组子的染色单体数 o-n n-a o-a o-n n-a o-a 2 3 4 5 6 7 总数 0 4 0 0 2 2 2 2 0 2 0 2 2 4 2 2 2 2 1 90 5 90 1 5 0 4 0 0 180