Gateway载体构建剖析.pptVIP

Gateway技术克隆、表达新方法 Gateway技术 Gateway技术： 一种克隆操作平台：把目的基因克隆到入门载体（Entry Vector）后，就不用依赖限制性内切酶，而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶，高效、快速地将目的基因克隆到其它的受体载体（Destination Vector，目的载体）上。 Gateway技术特点： 通过去除冗长的亚克隆步骤节省操作时间，同时将目的基因转移到多个表达系统，在任何选择的表达系统如细菌，酵母，昆虫，或哺乳动物进行基因的分析表达。 Gateway技术的灵活性： Gateway技术的原理 Gateway的原理也是建立在噬菌体DNA定点整合到细菌宿主基因组上。在噬菌体和细菌的整合因子（INF、Int）的作用下，lambda的attP位点和大肠杆菌基因组的attB位点可以发生定点重组，lambda噬菌体DNA整合到大肠杆菌的基因组DNA中，两侧产生两个新位点：attL和attR。这是一个可逆的过程，如果在一个噬菌体编码蛋白Xis和IHF、Int的共同介导下这两个新位点可以再次重组回复为attB和attP位点，噬菌体从细菌基因组上裂解下来。这一过程的方向是受控于两个重要因素：存在的介导蛋白和重组位点。 整合后的附着位点为 attL（BOP’） attR（POB’） 整合位点---attB att