HCV的结构及分布说课.ppt

HCV 病原体 1974年Golafield 首先报告输血后非甲非乙型肝炎。1989年美国科学家迈克尔·侯顿(Michael Houghton)和他的同事们利用一种新的技术手段——分子生物学方法，终于找到了病毒的基因序列，克隆出了丙肝病毒，由于HCV基因组在结构和表型特征上与人黄病毒和瘟病毒相类似，将其归为黄病毒科HCV。 HCV病毒体呈球形，直径小于80nm（在肝细胞中为36～40nm，在血液中为36-62nm ），为单股 正链RNA病毒，在核衣壳外包绕含脂质的囊膜，囊膜上有刺突。HCV仅有Huh7, Huh7.5, Huh7.5.1三种体外细胞培养系统，黑猩猩可感染HCV，但症状较轻 。 HCV结构 C 　成熟的C是通过128位半胱氨酸二硫键稳定二聚的体。 D1用于RNA绑定，从而促进核壳体组装 。同时还参与和细胞因子的互做，从而影响宿主细胞的功能。 D2：两个亲水脂性的α螺旋 在病毒的装配过程中能和NS5A互做 膜蛋白 　包括感染病毒粒子的组装,病毒侵入,以及与内膜融合 。 作为跨膜蛋白：N端在膜外。C端在胞内。并C端且还有一小段横跨膜，形成剪刀结构 E2上有HVR1，HVR2，PePHD【PKR/eIF2 】结合 还涉及hcv侵入时的识别宿主细胞表面受体。 P7 两个横跨膜的α螺旋一般是6聚物/7物 N端，C端都指向内质网。 对于复制不是很必要，但对于装配以及 释放。 具体功能不清楚;可能是抑制细胞细胞器 的酸化 ，从而防止新生颗粒过早段构 的变化。 NS2 对病毒的复制没有影响，唯一作用就是切割NS2-NS3蛋白连接处。 NS3-4A N端的1/3是丝氨酸蛋白酶，C端2/3是NTP激酶，RNA解旋酶 主要参与病毒ORF的剪切。 4A：其作为NS3丝氨酸蛋白酶的辅助因子，与NS3形成稳定的蛋白复合物，对丝氨酸蛋白酶活性有重要的调节作用． NS4B 是一种高度疏水的蛋白，至少4个跨膜区，是膜相关定位蛋白．其主要作用包括抑制翻译，调节NS5B RNA依赖的RNA聚合酶的活性，引起细胞转化，诱导细胞非折叠蛋白反应等 NS5A:蛋白位于基因组6 258～7 601 nt位点，编码448个氨基酸，是高度磷酸化的非结构蛋白．目前发现，它参与了HCV多种蛋白的成熟和RNA复制，并调控宿主细胞多种基因表达，刺激细胞增殖，抑制细胞凋亡以及影响干扰素疗效． NS5B具有依赖于RdRp)活性，RdRp是HCV RNA复制的关键酶．NS5B是一个尾部锚定蛋白(tail一柚choredprotein)．其C端21个氨基酸区域疏水性较高，其中含有4个亮氨酸组成的基序(motif)，在细胞中起到定位的作用，将NS5B蛋白锚定于近核周的内质网上，同时与NSSB的催化中心相互作用来调节NS5B的聚合酶活性． HCV分型依据 ①测序法：通过PCR扩增有代表性的基因片段（如5‘-UTR、C-E1和NS5B），再进行核苷酸序列测定，此为HCV基因分型的“金标准”。 ②型特异性引物扩增：根据不同HCV基因型在某一区段（主要是保守区）序列的差异，设计一系列型特异性引物，不同HCV基因型可扩增出长度大小不同的片段，并以此分型。 ③型特异性探针杂交法：通过将生物素或荧光素标记型特异性探针固相化在膜或芯片上，与实时定量（real-time,RT）-PCR扩增的病毒产物进行杂交后，经扫描判读出HCV基因型。用于该分型方法的区段是5‘-UTR及Core区。 ④基因芯片法：将许多特定的寡核苷酸片断作为探针，有规律地排列固定于支持物上，然后与待测的标记样品的基因按碱基配对原理进行杂交，再通过激光共聚焦荧光检测系统对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一个探针上的荧光信号进行分析比较，从而迅速得出需要的信息。 ⑤限制性片段长度多态性法：利用限制性酶识别RT-PCR扩增的特定区域（5‘-UTR、C-E1和NS5B）的型特异的切割位点，将其分解为长短不同的若干片段以确定分型，该方法常用酶为HaeⅢ、RsaⅠ、MvaⅠ、HinfⅠ及ScrfⅠ，利用这些酶可分开6个基因型 1型全球分布 2型分布 3区域分布 4型 5 6 7 WHO数据 起源 传播途径 1、输血及血制品曾是最主要的传播途径，常见的血液透析，输血等。国内曾单采血浆回输血细胞时污染，造成丙型肝炎暴发流行，输血后肝炎70%以上丙型肝炎，随着筛查方法的改善，此传播方式已得到明显控制，但抗HCV阴性的HCV携带供血员尚不能筛除，输血仍又传播丙型肝炎的可能，特别是反复输血及血制品者。2、非输血途径传播 。【吸毒】此途径主要为反复注射、针刺、含HCV血液反复污染皮肤黏膜隐性伤口及性接触等其他密切接触方式而传播，这是散发性丙肝传播的途径。3、母婴传播。HCV阳性母亲传播给新生儿的危险率为2%，分娩时阳性则高达