胃蛋白酶原介绍.ppt

胃蛋白酶原 咸阳市中心医院消化内科 贾泽博 一、概述 胃蛋白酶原（Pepsinogens，PG）为胃蛋白酶的前身，是胃主细胞的产物，属于门冬氨酸蛋白酶家族。血清胃蛋白酶原分胃蛋白酶原I（Pepsinogens I，PG I）和胃蛋白酶原II（Pepsinogens II，PG II），其水平可反映胃蛋白酶分泌及胃粘膜状态和功能。通常情况下，约有1%的PG透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的PG在血液中非常稳定。血清PG I和PG II反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。当胃黏膜发生病理变化时，血清PG含量也随之改变。PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针，胃酸分泌增多PGI升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低；PGII与胃底粘膜病变的相关性较大（相对于胃窦粘膜），其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，联合测定PGI和PGII比值可起到胃底腺粘膜“血清学活检”的作用。 胃蛋白酶原对胃部疾病的发展历程，一般可表述为：浅表性胃炎——胃粘膜糜烂溃疡——萎缩性胃炎——胃癌，及其它疾病具有良好的诊断和筛选作用。检测血清或者血浆中的胃蛋白酶原I、II的含量及I/II，具有简便、快速的优势，避免了X-射线对人体的侵害和胃镜的不便。 二、相关领域国内外技术现状、发展趋势及现有工作基础 胃蛋白酶原（PG）检测（时间分辨荧光免疫分析法）的优势、试剂盒主要组成及其原理。 血清PG的检测方法包括放射免疫测定法(RIA)、酶免疫测定法(EIA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)等。RIA法早年在日本应用较多，但因有放射性，应用受到限制。EIA法所需样本量少，具有较高的特异性和灵敏度。铕标记TRFIA法检测是一种灵敏、简便的检测方法，克服了RIA法、酶联免疫分析法(ELISA)只能分别测定PGⅠ、PGⅡ后再计算PGR而带来的误差积累，特别是对提高PGR参数检测准确性具有突出的优势。检出时间应进一步缩短，获得较高的灵敏度及特异度，并认为该法检测方便，设备易获得，试剂易保存，无放射性，更适合于发展中国家大规模胃癌筛查。 试剂盒主要组成：1.PG参考标准品：六瓶；2.Eu标记抗PG单克隆抗体一瓶；3.缓冲液：一瓶，50ml；4.增强液：一瓶，30ml；5.浓缩洗板液：一瓶，40ml；6.抗PG单克隆抗体包被板：一块，96孔。产品有效期：保存于2-8℃，有效期6个月。 检验原理：该试剂盒基于微孔板双抗体夹心原理的时间分辨荧光免疫分析，一株特异性抗体预先包被在微孔板的孔里，当检测样品加入后，它可以捕获血清中的PG，另一株加入到96微孔板内的孔里，标记了铕离子的特异性抗体也可以结合到PG上，这样在微孔板的孔里就形成了抗体PG-铕标记抗体的多层免疫复合物，其它的物质和未结合的铕标抗体被洗涤液洗去，加入增强液，微孔表面免疫复合物中的铕离子被荧光增强液解离并形成稳定的荧光鳌合物，在时间分辨荧光分析仪上测定相应发光强度。根据PG浓度的系列参考标准品的相应发光强度的得到标准曲线，通过双对数数学模型回归处理得到回归直线，未知样品的PG浓度可以通过其相应发光强度从回归直线上反算出来。 本项目使用的胃蛋白酶原试剂盒由无锡市江源实业技贸公司自主研发的产品，辅助测定机器有离心机、洗涤机、水平摇匀仪、时间分辨荧光免疫分析仪。2009年10月正式准予临床应用。 试剂盒主要组成：1.PG参考标准品：六瓶；2.Eu标记抗PG单克隆抗体一瓶；3.缓冲液：一瓶，50ml；4.增强液：一瓶，30ml；5.浓缩洗板液：一瓶，40ml；6.抗PG单克隆抗体包被板：一块，96孔。产品有效期：保存于2-8℃，有效期6个月。 离心机：利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力，分离出血清，作为测定抗原。 水平摇匀仪：当检测样品加入后，试剂盒可以捕获血清中的PG，另一株加入到96微孔板内的孔里，标记了铕离子的特异性抗体结合到PG上，形成抗体PG-铕标记抗体的多层免疫复合物，在水平摇匀仪上充分摇匀，使抗体PG-铕标记抗体的多层免疫复合物更加充分的结合。 洗涤机：洗去其它的物质和未结合的铕标抗体。 时间分辨荧光免疫分析仪：微孔表面免疫复合物中的荧光鳌合物，在时间分辨荧光分析仪上测定相应发光强度。 最后根据PG浓度的系列参考标准品的相应发光强度的得到标准曲线，通过双对数数学模型回归处理得到回归直线，未知样品的PG浓度可以通过其相应发光强度从回归直线上反算出来。 胃蛋白酶只在酸性环境中发