细菌的分离与鉴定介绍.pptVIP

微生物纯种分离 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落(colony)。 （二）、纯种平板分离的不同方法 分区划线法（蛇形线法）操作图 连续划线法操作图 二、选择培养分离 创造适于目的微生物生长条件 选择培养基 三、课 题 延 伸 分解纤维素的微生物的分离 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 [三]样品的稀释 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 三.结果分析与评价 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。 * 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 第二节 分离特定的微生物并测定其数量 用液体培养基分离、培养 用固体培养基分离、培养 二元培养物分离、培养 选择培养分离 单孢子分离 微生物分离方法 要分离微生物，必须根据它的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法，经过一定时间的培养后，使这种微生物在群落中的数量不断增加，在通过平板稀释法等进行纯培养分离 将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程 纯培养（pure culture） 在适宜条件下培养纯种获得的培养物（群体） 菌落 一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养； 单个微生物只在固体培养基上形成菌落； 在液体培养基中不会形成菌落 同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落 菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种细菌在一定条件下形成固定的菌落特征。不同种或同种在不同的培养条件下，菌落特征是不同的。这些特征对菌种识别、鉴定有一定意义。 微生物样品 多种混杂 某种方法 分散成单个微生物 平板 培养 单菌落 每个菌落为纯种（纯培养） 单菌落转接培养 纯种（纯培养） （一）、微生物纯种分离的原理和方法 一、用固体培养基（营养琼脂平板）分离纯种 平板分离法：将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落 微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。 1.平板划线法 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 纯化细菌 2.稀释涂布平板法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀释操作和涂布平板操作。 从土壤中分离纯微生物 104/ml 103/ml 102/ml 101/ml 涂布平板法 稀释倒平板法 1、涂布平板法（spread plate method) 2、稀释倒平板法（倾注平板法）（pour plate method) 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 3、平板划线法（streak plate method） 分区划线法适用范围： 适用于浓度较大的样品 连续划线法适用范围： 适用于浓度较小的样品 原理 促使目的微生物快速生长呈优势菌 抑制非目的微生物生长 从混杂微生物中分离目的微生物 1、利用选择培养基进行直接分离 选择培养基 只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: