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实验四 酶促转氨反应 一 实验原理 氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应称转氨反应。由转氨酶催化的转氨反应是氨基酸代谢的重要反应之一。经转氨后，原来的氨基酸变成了酮酸，而原来的酮酸则变成新的氨基酸。 生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成腙，在碱性环境下呈红色，红色的深浅与丙酮酸生成量成正比。 二 实验步骤 1. 称取0.2g八仙花叶片——用剪刀将叶片尽可能的剪碎——放于研钵中 2. 量取3ml磷酸缓冲液，分三次加入研钵中：第一次加1ml磷酸缓冲液研磨，磨成匀浆后倒入离心管中；然后用缓冲液将研钵洗涤2次，分别将洗涤液倒入离心管中；然后在离心管上做好记号，统一离心，转速5000，时间10min,离心完后将上清液倒入小烧杯中即为酶粗提液。 3. 取4支试管——编号——按下表要求加样: 4.加样完毕——摇匀——用橡皮筋将4支试管扎牢——置于40℃水浴中加热30min 5.取出冷却——每支试管各加0.5ml 2，4-二硝基苯肼——反应5min——再每支试管各加5ml 0.4N的 NaOH溶液——摇匀——静止10min——在λ=530nm下，测量吸光度OD值 三 完成实验报告 * 0.1 0.5 0.6 磷酸缓冲液(ml) 0.5 标准丙酮酸液(ml) 0.5 Ala和α-酮戊二酸(ml) 0.1 0.1 酶粗提液（ml） 4 3 2 1 试管号 *