第三章核酸化学讲述.pptVIP

目的与要求 （1）熟悉核酸的化学组成；DNA的分子结构；RNA的分子结构；核酸的理化性质。 （2）了解核酸的种类分布与功能。 染色体包装的结构模型 多级螺旋模型 压缩倍数 7 6 40 5 （8400） DNA → 核小体 → 螺线管 → 超螺线管 → 染色单体 2nm 10nm 30(10)nm 400nm 2~10μm 一级包装 二级包装 三级包装 四级包装 （二）rRNA 占细胞RNA总量的80%，与蛋白质（40%）共同组成核糖体。 原 核 生 物 真 核 生 物 核糖体 rRNA 核糖体 rRNA 70S（30S、50S） 16S、5S、23S 80S（40S、60S） 18S、5S、5.8S、28S ? （三）mRNA与hnRNA mRNA约占细胞RNA总量的3~5%，是蛋白质合成的模板。 真核生物mRNA的前体在核内合成，包括整个基因的内含子和外显子的转录产物，形成分子大小极不均匀的hnRNA。 （四）snRNA和asRNA snRNA主要存于细胞核中，占细胞RNA总量的0.1~1%，与蛋白质以RNP（核糖核酸蛋白）的形式存在，在hnRNA和rRNA的加工、细胞分裂和分化、协助细胞内物质运输、构成染色质等方面有重要作用。 asRNA可通过互补序列与特定的mRNA结合，抑制mRNA的翻译，还可抑制DNA的复制和转录。 （五）RNA的其它功能 1981年，Cech发现RNA的催化活性，提出核酶（ribozyme）。 大部分核酶参加RNA的加工和成熟，也有催化C-N键的合成。23SrRNA具肽酰转移酶活性。 RNA在DNA复制、转录、翻译中均有一定的调控作用，与某些物质的运输与定位有关。 六、核酸的性质 （一）一般理化性质 1.为两性电解质，通常表现为酸性。 2.DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末，不溶于有机溶剂。 3.DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。 4.RNA能在室温条件下被稀碱水解而DNA对碱稳定。 5.利用核糖和脱氧核糖不同的显色反应鉴定DNA与RNA。 （二）核酸的紫外吸收性质 核酸的碱基具有共扼双键，因而有紫外吸收性质，吸收峰在260nm（蛋白质的紫外吸收峰在280nm）。 核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30~40%，当核酸变性或降解时光吸收值显著增加（增色效应），但核酸复性后，光吸收值又回复到原有水平（减色效应）。 （三）核酸结构的稳定性 1.碱基对间的氢键；2.碱基堆积力；3.环境中的正离子。 （四）核酸的的变性 ：双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规线团状，只涉及次级键的破坏。 DNA变性是个突变过程，类似结晶的熔解。将紫外吸收的增加量达到最大增量一半时的温度称熔解温度(melting temperature, Tm)。 Tm Tm 影响Tm的因素： （1）G-C的相对含量 （G+C）% =（Tm — 69.3）× 2.44 （2）介质离子强度低，Tm低。 （3）高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键的能力。 （4）变性剂如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键，妨碍碱基堆积，使Tm下降。 （五）核酸的复性（退火） ：变性核酸的互补链在适当条件下重新缔合成双螺旋的过程。 影响复性速度的因素： （1）单链片段浓度 正比 （2）单链片段的大小 反比 （3）片段内重复序列的多少 正比 （4）溶液离子强度的大小 一定 （5）溶液温度的高低 （T – 25℃） 适合，不宜低 （六）分子杂交 ：在退火条件下，不同来源的DNA互补区形成氢键，或DNA单链和RNA链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。 探针：用放射性同位素或荧光标记的DNA或RNA片段。 原位杂交技术：直接用探针与菌落或组织细胞中的核酸杂交，未改变核酸所在的位置。 点杂交：将核酸直接点在膜上，再与核酸杂交。 Southern印迹法：将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，再进行杂交。 Northern印迹法：将电泳分离后的RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交。 * 第三章 核酸化学 (8学时) 核酸的概念和重要性 核酸的组成成分 （重点） DNA的结构 （重点） DNA和基因组 RNA的结构和功能 （重点）