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第四章 基因克隆的质粒载体 载体 载体（vector）是由在细胞中能够自主复制的DNA分子构成的一种遗传成分，通过实验手段可使其它的DNA片段连接在它的上面，进行复制。 第一节 质粒的一般特性 一、质粒DNA 1、概念 质粒是细菌细胞内携带的染色体外的DNA分子，是共价闭合的环状DNA分子（covalent closed circular，DNA cccDNA)，大小在1~200kb，能独立进行复制。 质粒“友好”地借居于宿主细胞内。靠宿主细胞才能完成自己的复制，而质粒对宿主细胞的生存不是必需的。 质粒不是单纯的寄生，所携带的遗传信息能赋予细菌特定的遗传性状。 2、质粒的存在形式：体内呈共价闭合环状 ① 超螺旋的SC构型 （ccc DNA） ② 松弛开环的OC型 （oc DNA） ③ 松弛线性的L构型（L DNA） 3、分子量 最小的质粒仅能编码2～3种中等大小的蛋白质，分子量约106dal 最大的可达108dal 4、基因克隆用的质粒载体必需具备： 复制基因 选择性标记 克隆位点 二、质粒DNA编码的表型 质粒DNA占染色体组的1～3％，编码重要的非染色体控制的遗传性状。 抗性特征、代谢特征、修饰寄主的生活方式等。 1、抗性质粒 包括抗菌素抗性（R）质粒和金属抗性质粒。 R质粒的进化、转移和扩散给抗菌素治疗带来很大麻烦，是医学所面临的重大问题之一。 2、毒力质粒 许多细菌的致病力和毒性与质粒有关，如大肠杆菌肠毒素和定居抗原，破伤风毒素，炭疽毒素，溶血毒素，苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白，植物冠瘿病（Ti质粒）和发根病（Ri质粒）。 3、降解质粒 许多环境污染物的降解途径由质粒基因编码，降解基因组成几个操纵子，操纵子的表达受调节基因控制。 目前，已经测定全序列并注释基因的降解质粒有10余种，如尼龙寡聚体降解质粒pOAD2，芳香烃降解质粒pNL1等。 Plasmid Substrates Strain Size (bp) Catabolic gene References pOAD2 Nylon Flavobacterium K172 45519 nylA Microbiology oligomers nylBC 1995,141:2585 pNL1 Biphenyl,naphthalene Sphingomonas 184457 pbh, xyl, J. Bacteriol. m-xylene, p-cresol aromaticivorans F199 nah, pch 1999,181:1585 pADP-1 Atrazine Pseudomonas ADP 108845 atzA,atzB J. Bacteriol. atzC,atzDEF 2001,183:5684 pWWO Xylene,Toluene P. putida mt-2 116580 xyl Envi.. Microbiol. 2002,4:856 pAO1 Nicotine
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