动植物细胞大规模培养介绍.ppt

动植物细胞大规模培养 胖虹彦 20111052122 细胞融合技术 细胞融合(cell fusion)，是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞 细胞融合技术的主要过程 1.制备原生质体 2.诱导细胞融合 3.筛选杂合细胞 影响原生质体制备的因素 1.亲本的选择及预处理 2.除壁酶的选择 3.酶浓度 4.酶解温度 5.酶解时间 6.渗透压稳定剂 原生质体融合方法 1.生物学法（动物细胞融合） 2.化学融合剂法 3.物理法 原生质体的再生 使其细胞壁再生长出来，恢复细胞原有形态和功能； 主要影响的因素： 1.菌种的特性 2.原生质体制备条件 3.再生培养基成分 4再生培养条件。 融合子的选择 融合子的选择主要咦靠两个亲本的选择性遗传标记，在选择性培养基上，通过两个亲本的遗传标记互补而挑选出融合子。 融合后的情况： 1.真正的融合，即杂合体或重组体 2.暂时融合，形成异合体。 动植物细胞大规模培养技术 动植物细胞在体外条件下的存活或生长，此时细胞不再形成组织。 组织培养是指从机体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外进行培养，使之生存和生长。此时培养物可能保持组织分化和组织结构功能。 动物细胞大规模培养技术 流程 机体组织-切碎-酶解-离心收集-单细胞-培 养-种子-液氮冷藏-复活培养-扩大培养-反 应器大规模培养 动物细胞培养工艺 1、培养流程 （1）将动物组织切成碎片； （2）用胰蛋白酶处理，分散组织得到单个细胞； （3）离心收集细胞； （4）植入营养培养基，细胞增值到覆盖瓶壁表面； （5）用胰蛋白酶消化使细胞从瓶壁脱落，再接种到培养瓶扩大培养； （6）获得足够量的细胞； （7）接入大规模培养生物反应器； （8）回收产品。 动物细胞培养工艺 2、培养方法 （1）分批培养； （2）流加培养； （3）半连续培养； （4）连续培养。 动物细胞的培养特性 1.细胞生长缓慢，易受微生物污染，培养时需用抗生素；2.动物细胞较微生物大得多，无细胞壁，机械强度低，适应环境能力差；3.培养过程需氧量少，且耐受强力通风与搅拌；4.在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在，培养过程具有群体效应、锚地依赖性、接触抑制性及功能全能性；5.培养过程产物分布于细胞内外，反应过程成本较高，产品价格昂贵；6.大规模培养时，不可套用微生物反应的经验；7.原代培养的细胞一般繁殖50袋即退化死亡。 动物细胞的营养需求及培养基 培养基 A、物理性质 1、pH值： 正常成纤维细胞：pH7.4—7.7；转化细胞：pH7.0—7.4。 酚红的呈色： 2、缓冲盐：碳酸氢钠 3、渗透压 4、粘度 细胞大规模培养方式 1.细胞悬浮培养法 2.固定化培养法 3.贴壁培养方法 悬浮培养 (Suspension culture) 悬浮适应细胞、源于循环系统的细胞及肿瘤细胞等 非贴壁依赖性细胞无需支撑面 ,细胞或细胞聚集体悬浮于液体培养基中增殖. 悬浮培养是大规模细胞培养的理想方式. 固定化培养 ( Immobilizing culture) 固定化培养是一种包埋培养方式 ,适用于贴 壁依赖性细胞和非贴壁依赖性细胞.它具有剪 切力低、传递效果好和抗污染能力强、细胞 生长密度高、产物易于收集和分离纯化等特 点 贴壁培养 (Monolayer culture) 贴壁培养主要适用于贴壁依赖性细胞. 一般源于实体组织的细胞需要相互依赖 ,需贴附于不起化学作用的物质 (玻璃或塑料等无活性物质 )的表面生长、生存和维持 ,并最终在附着面生长至单层 ,铺满平面时便会发生接触抑制. 动物细胞大规模培养的条件控制 培养装置 培养条件 培养装置的要求 1.搅拌桨叶的形状和搅拌转速要有特殊设计 2.培养系统必须保持长期无菌的状态 3.培养罐、配管的材质必须要对培养的细胞无毒害作用，通常都采用含钛的不锈钢 培养装置分类 1.悬浮培养器 2.贴壁培养器 3.微载体悬浮培养器 细胞悬浮培养器 实验室规模的培养装置：液体悬浮培养瓶 培养条件 1.培养温度（37±0.5） 2.溶解氧 3.PH(7.2~7.4) 4.罐压 5.搅拌速度 植物细胞大规模培养技术 流程： 外植体选择-消毒并切口-半固定培养基培养-愈伤组织三角瓶液体振荡培养-单细胞种子-液氮冷