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实验二 血红蛋白测定 一、氰化高铁血红蛋白测定法 【目的】 掌握氰化高铁血红蛋白 (HiCN) 测定方法的原理及操作。 【原理】 在HiCN转化液中，红细胞被溶血剂破坏，各种血红蛋白（SHb除外）中的Fe2+被高铁氰化钾氧化成Fe3+，形成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰化钾提供的氰根离子（CN-）结合生成稳定的复合物氰化高铁血红蛋白(HiCN )。棕红色的HiCN在波长540nm处有吸收峰，用分光光度计测定该处的吸光度，再换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或用HiCN参考液进行比色法测定制作标准曲线供查阅。 【操作】 1．加转化液 2．采血与转化 3．测定吸光度 4．计算 5．报告方式：XX g／L 【注意事项】 1．分光光度计校正。 2．HiCN转化液应以蒸馏水配制（不能用去离子水），pH稳定在7.0～7.4；HiCN转化液中氰化钾是剧毒品，配制转化液时要按剧毒品管理程序操作；HbCO转化为HiCN的速度缓慢，可适当延长转化时间或加大试剂中K3Fe(CN)6的用量。 二、十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法 【目的】 了解十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）测定法的原理及操作。 【原理】 十二烷基硫酸钠为一种阴离子表面活性剂，具有轻度氧化作用；血液中除SHb以外的所有血红蛋白均可与低浓度的SDS作用，亚铁血红素被氧化成稳定的棕红色高铁血红素样复合物（SDS-Hb）。由于SDS-Hb的毫摩尔消光系数尚未确认，故不能根据标本吸光度直接计算结果；需用HiCN法及本法分别测定多份不同浓度抗凝血或溶血的血红蛋白浓度和吸光度，以此绘制标准曲线，间接计算血红蛋白浓度。 【操作】 1．制备标准曲线 2．测定 【注意事项】SDS液可破坏白细胞，因此对某些血液分析仪不宜使用。 * *