第八章PPT课件下载.ppt

8.1 概 述 层析是根据混合物中，溶质在互不相溶的两相之间分配行为的差别，引起移动速度的不同而进行分离的方法 又称色谱法，层离法，层析法; 可用于生产规模，也可作为分析检测，控制产品的质量。 8.1 概 述 1903年，俄国植物学家Tswett提出色层分离法的概念 1931年，Kuhn和Lederr在氧化铝和碳酸钙柱体上，以制备规模分离胡罗卜素和叶黄素。 1938年，适用范围扩展到无色物质。 1940～1943年间，Tswett提出了前流分析和置换分析法。 50年代，气相色谱Martin和Synge，60年代，液相色谱 DNA重组技术的发展，制备色谱研究成为热点 8.1 概 述 8.1 概 述 英国生物学家Martin和Synge(1952诺贝尔化学奖 他们首先提出了色谱塔板理论。以理论塔板来表示分离效率，定量的描述、评价层析分离过程。其次，他们根据液－液逆流萃取的原理，发明了液－液分配色谱。 特别是他们提出了远见卓识的预言：一、流动相可用气体代替液体，与液体相比，物质间的作用力减小了，这对分离更有好处；二、使用非常细的颗粒填料并在柱两端施加较大的压差，应能得到最小的理论塔板高(即增加了理论塔板数)，这将会大大提高分离效率。 8.1 概 述 分离效率高：每米柱可达几千至几十万的塔板数，适于极复杂混合物的分离。 应用范围广 选择性强：通过操作方法，洗脱方式和操作条件来实现。 高灵敏度的在线检测：紫外、荧光、折光等 快速分离：高效层析剂和高压液相色谱 过程的自动化操作 8.1 概 述 色谱分离的规模： 色谱分析：10mg 半制备：10～50mg 制备：0.1～10g 工业生产：20g/d 分析色谱与制备及工业色谱的比较： 应用色谱技术范围不同：分析（柱，纸和薄板）；制备（柱） 操作上不同：分析（进样量越小越好，检测灵敏度越高越佳；制备（进样量越大越好，色谱柱适当大） 色谱分离理论不同： 理论塔板数的不同；分配系数不同；样品保留值与峰高的不同 原理： 层析是根据混合物中，溶质在互不相溶的两相之间分配行为的差别，引起移动速度的不同而进行分离的方法； 互不混溶的两相分别称为固定相和流动相； 料液中的溶质在固定相和流动相之间发生扩散传质，产生分配平衡，分配系数大的溶质随流动相移动的速度小。 层 析分 类 流动相与固定相 固定相的形状 压力 流动相的流动方向 分离操作方式 分配机理 层析分类 吸附色谱与其它色谱法的异同点 层 析 分 类 1. 流动相与固定相 根据流动相的相状态分气相层析法、液相层析法和超临界流体层析法 ； 固定相为液体的分配层析法、固定相为固体的吸附层析法以及固定相为固定于固体表面的液体薄层(以固体为载体)的分配层析法等。 层 析分 类 2. 固定相的形状 根据固定相或层析装置形状的不同，液相层析法又分纸层析法、薄层层析法和柱层析法 纸层析和薄层层析多用于分析目的，而柱层析易于放大，适用于大量制备分离，是主要的层析分离手段。 层 析 分 类 3. 压力 在以固体为固定相的液相柱层析中，根据操作压力的不同，分为低压(压力一般小于0.5MPa)、中压(压力为0.5～4.OMPa)和高压(压力为 4.0～40MPa)液相层析法； 高压液相层析法中层析介质(固定相)微细，分离精度高、速度快，主要用于成分分析。大量制备分离常用低压或中压液相层析法。 层 析 分 类 4.流动相的流动方向 轴向流层析； 径向流层析：溶质在半径方向上得到分离，优点是规模放大时，半径不变，通过增加柱高提高处理能力，且压降不会增加，适于大规模；但造价高。 层 析 分 类 5.分离操作方式 洗脱展开 (elution development) 迎头分析 (front analysis) 顶替展开 (Elution chromatography) 层 析 分 类 5.分离操作方式 ：洗脱展开 降样品尽量浓缩，引入色谱柱上部，用溶剂洗脱（溶剂与固定相无亲和力），依亲和力的大小而速度不同，前进靠溶剂的推动。 层 析 分 类 5.分离操作方式 ：洗脱展开 恒定洗脱法：不改变洗脱剂组成，优点是操作简单，不需要较复杂的设备；但洗脱剂组成需实验确定，太弱的洗脱剂不能有效洗脱，太强的洗脱剂，分辨率较差。 逐次洗脱法：洗脱剂组成至少改变一次，优点是操作简单，重现性好，但洗脱条件一次改变后，有些组分会共同洗下，影响分离效果。 梯度洗脱：逐次改变洗脱剂的组成，优点是消除重叠峰现象，但洗脱体积过大，组分浓度变稀。 浓度梯度制造器 层 析分 类 5.分离操作方式：迎头分析 又称前流，前沿分析法，将待分离的混合物不断输入柱中，让它一直流下去，直到过程结束。亲和力小的先流出，一般不能达到组分的分离，只有作