本科生实验重点介绍.pptVIP

分离工作应在无菌条件下进行，无菌室和超净工作台是分离不可缺少的设施。 制备涂片标本→染色 (1)涂片 干燥 固定: （2）草酸铵结晶紫染色1min 水洗干燥 （3）碘液媒染1min 水洗 干燥 　（4）95%乙醇脱色15~20秒 水洗 干燥 （5）番红复染1min 水洗 干燥 镜检 注意事项 （1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 （2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 2 1 * 实验一 培养基的制作 一、目的要求 了解培养基的配制原理，掌握培养基的制备方法。 二、基本原理 在植物病理学研究工作中经常要使用各种不同的培养基。培养基是按照生物生长繁殖所需要的各种营养，用人工方法配制而成的营养基质。 在植物病理学研究中，最常用培养基有马铃薯葡萄糖培养基，主要用于分离培养病原真菌。 在培养基配制完之后，必须经过灭菌，以便彻底杀死其中原有的一切微生物。 三、材料、试剂与仪器 1．材料 马铃薯。 2．试剂 葡萄糖、琼脂等。 3．仪器与用品 高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（或酸度计）、试管、铝锅、搅拌棒、三角瓶、烧杯、漏斗、量筒、纱布、棉花、天平等。 四、操作步骤 PDA培养基（马铃薯葡萄糖培养基）配方 去皮马铃薯 200g ; 葡萄糖 20g ;琼脂15～20g;蒸馏水1000ml 自然pH ,在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖，这样配制的培养基也称为PSA培养基。 1．称量: 去皮马铃薯 200g ，葡萄糖 20g ，琼脂15 -20g 。 提示 琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的 15g 就够了，质量差的应适当增加。另外，在夏天气温较高时，适当增加用量。 2．将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min。用纱布滤去马铃薯残渣。 3．将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。 提示 在琼脂融化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 4．加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml。 提示 通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，如1000ml,2000ml等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。 5．分装 根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管，其量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。 6. 封口 在管口或瓶口用塑料膜封口。也可以用棉塞，要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。 7.包扎 加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。 8．灭菌 将培养基以0.1Mpa，121C , 高压蒸气灭菌20min。 9．搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至 50C 左右，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 培养基经灭菌后，必须放在37℃温箱培养24h，无菌生长者方可使用。 五、所需时间流程 培养基配制 高压灭菌 培养 观察 六、实验作业 各组上交按计划制备的培养基。 七、思考题 1为什么有的培养基要调pH值，有的可以不调? 2加压蒸气灭菌为什比干热灭菌所要求的温度低、时间短? 3．想一想，试一试，将几只试管包扎在一起比较牢固？ 实验二 植物病害的调查 通过植物病害的调查，了解植物病害种类、分布和发生情况，是掌握病害的发生发展规律，开展病害防治的基础工作。 通过调查研究，才能制定防治策略，提出切合实际，行之有效的防治方法与适当的防治适期。防治前了解情况才能做到心中有数，防治后调查可以检查防治效果及存在问题。 一、目的要求 了解植物病害田间取样的各种方法和掌握调查病情的方法，学会计算发病率和病情指数，以及进一步估计因病造成的损失等。 二、材料和用具 大棚蔬菜病害；笔记本、铅笔、米尺。 三、内容与方法 病害调查可分为一般调查和重点调查两类，根据调查目的不同，再决定调查的方法。 3.1 一般调查 当一个地区有关病害发生情况的资料很少，可先进行一般调查，主要是了解病害的分布和发病程度，调查的面要广，并且要