第四章 DNA的复制概述.ppt

DNA的复制 DNA Replication 讲授：陈友 生命的遗传实际上染色体DNA自我复制的结果，染色体DNA的自我复制主要通过半保留复制来实现的，是一个以亲代DNA分子为模板合成子代DNA链的过程。 ?亲代DNA必须以自身分子为模板来合成新的分子，准确地复制成两个拷贝，并分配到两个子代细胞中去，才能真正完成其遗传信息载体的使命。 教学重点 DNA复制的相关概念，特点。 参与复制的主要物质及其作用 问题： 1、复制可以随机起始吗？ 2、复制是单向的还是双向的？ 3、新生链合成的方向是从5’to 3 ’ 还是3 ’to 5’，还是两个方向均可？ 4、复制时两条链是完全解开吗？ 5、两条链是同时进行复制的吗？ 复制子（replicon） 复制子是基因组中能够独立进行复制的单位。每个复制子都有控制复制开始的复制起点（origin）以及终止复制的终点（terminus）。任何起点和终点之间的序列都作为复制子的一部分参与复制。 在一个细胞周期中，每个复制子只启动一次。 复制起点：复制子有控制启动复制的元件，称为复制起点(origin of replication)，常用ori来表示；可以起始一个复制循环，并可控制复制起始反应的频率。 复制终点：控制终止复制的元件，称为复制终点(termini); 复制叉（replication fork）：DNA复制时在DNA链上通过解旋、解链和SSB蛋白的结合等过程形成的Y字型结构称为复制叉或生长点（growing point）。在复制叉处作为模板的双链DNA解旋，同时合成新的DNA链。 DNA复制首先将双螺旋DNA解旋，这一过程需要特异的拓扑异构酶或解旋酶；DNA的复制至少需要20多种酶和蛋白质结合在复制叉部位，形成复杂的复制体结构。 半不连续复制 由于DNA双螺旋的两条是反向平行的，因此在复制叉附近解开的DNA链一条是5’-3’方向，另一条是3’-5’方向. DNA聚合酶活性是使DNA链沿5’-3’方向延申，所以就决定了前导链的复制是连续的，而滞后链的复制是不连续的。因此称为DNA的半不连续复制。 二、复制方向 三、复制速度 真核生物复制叉移动速度为1~3kb/min，细菌DNA复制叉的移动速度为50kb/min，相差20~50倍； 真核生物染色体在全部复制完成之前起点不再重新开始复制，而在快速生长的原核生物中，起点可以连续发动复制。  1）引物(primer)：复制需要一小段RNA作引物 2）模板(template)：解开成单链的DNA母链 3）底物(substrate)或称原料：dATP、dGTP、dCTP、dTTP 4）能源：需ATP供能，原料dNTP本身也是高能化合物 5）酶和蛋白质因子：DNA聚合酶(polymerase)等 讨论： 1、Pol I and III功能上有哪些相同点？ 2、 Pol I and Pol III功能上有哪些不同？ [1] 5 ’ →3’核酸外切酶活性不同。 [2] Pol I 可进行缺刻平移、去除引物。 [3] 二者聚合酶活性不同，Pol III是大肠杆菌 DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。 [4] Pol I 主要功能是进行DNA 损伤修复。 （二）DNA聚合反应的特征 1、DNA的聚合反应是以dNTP为底物，以3’ →5 ’ DNA为模板，按碱基配对原则在3’-OH上加dNTP （DNA聚合酶对碱基的选择功能） 2、需二价正离子如Mg＋， 3’-OH作亲核进攻形成磷酸 二酯键 3、链沿5’ 3’方向延长 4、碱基互补配对，若错配则切除掉 （二）复制起始区的结构特点 1、富含AT 2、3个13bp的重复序列---解链的位点 3、4个9bp的重复序列----- DnaA结合位点 （三）复制起始引发的过程： 1、DNA复制起点双链解开 ，形成复制叉 GATCTNTTNTTTT TTATNCANA DnaA+ATP DnaB DnaC OriC （富含AT） 3×13bp重复序列 4×9bp重复序列 DnaA结合位点 HU +ATP ATP 过程： （1）约20个DnaA结合在4×9bp重复序列 （2）DnaA复制起始复合物使13bp重复序列变性， 形成开链 （3 ）DnaB与单链DNA结合（需要DnaC帮助）， 进一步解开DNA双链，形成复制叉 2、RNA引物的合成