发酵工程发酵工业菌种ppt.ppt

第一节 发酵工业菌种概述 第二节 发酵工业菌种筛选的原则与基本技术 第三节 发酵工业菌种改良 第四节 发酵工业菌种保藏 一、发酵工业菌种筛选的总趋势 二、分离筛选原理与技术 三、应用举例 野生菌→变异菌 自然选育→代谢控制育种 诱发基因突变→基因重组的定向育种 1.筛选的指导思想 2.分离筛选工作在实际中应用的几个方面 3.新种分离筛选 先分离纯化，再结合工艺要求进行筛选。 分离纯化同时富于筛选条件，一步得出所需菌株。 结果有两种可能： 获得适于工业发酵菌株 只获得选育所需的出发菌株 从被污染的生产及科研用菌中分离目的菌； 生产中长期使用的菌种的定期分离筛选 ； 从各种育种方法处理的微生物材料中分离筛选适于工业目的的优良菌株 ； 从已知菌种和大自然中分离新菌株 寻找新的发酵产品的产生菌； 寻找老产品的新的优良菌株。 根据目的菌有无选择性特征来选择分离方法 菌种的营养特征独特 生长特征独特 无选择性特征 根据产物的特征进行 随机分离 选择性分离的关键：生长培养条件的选择与控制，从而实现定向富集筛选。 取未成熟的酱醪样品1g至无菌磨口瓶中 ? ? 加麦芽汁至瓶口处，封塞，25℃培养24-48h 培养基中长出绢丝状波动物，镜检 杆状，阳性染色 初步断定乳酸菌 ? ? 用选择性培养基分批富集培养2-3代 稀释分离法分离单菌落，培养基为含麦芽汁、CaCO3的琼脂培养基? ? 根据透明圈挑选菌落 ? ? 性能测定（镜检杆状，染色阳性；乳酸纸层析鉴定） ? ? Rf值定性 （有机酸呈黄斑点） ?? 乳酸生成量测定（滴定法） 从产物入手，通过设计高产培养基和建立快速灵敏专一的筛选方法，从随机分离的菌落中筛选出所需的目的菌。 技术关键：产物合成条件的选择与控制及相应筛选方法的确定。 随机分离技术举例 抗生素产生菌的筛选 生长因子产生菌的筛选 多糖产生菌的筛选 筛选模型：试验菌 筛选方法： 铺菌法 复印平板法 液体培养筛选 筛选模型：氨苄青霉素和β-内酰胺酶产生菌（克雷白氏菌）协同 I II 无试样时（不含棒酸时），I对II菌作用不大 有试样时（含棒酸时），I对II菌恢复药效，棒酸抑制水解酶活性 筛选模型：营养缺陷型试验菌 筛选方法：利用被分离的微生物产物能否促进营养缺陷型试验菌生长 样品 ? ? 预处理 ? ? 初筛（除真菌） ? ? 在分离平板上生长获得多个单菌落 复印平板（copy 法） 平板培养，其中有产生氨基酸的菌落分泌氨基酸 对应到copy前相应 u.v线杀死长好的菌落 位置，找到目的菌落 再铺上一层含营养缺陷型试验菌的琼脂 培养后 产氨基酸菌落周围有生长圈 ? ? 取样特点：碳水化合物工业的废弃物 筛选方案：从菌落外观判断，选择外观呈粘液状的菌落，然后根据液体培养测定多糖含量来筛选高产菌。 取工业发酵液（含孢子）样品1环 放入带玻璃珠的装有10ml 无菌水的小三角瓶中，摇匀 ? ?采用稀释法制平板，获取单菌落 ?  斜面保藏 高产菌恢复 根据高产菌的特点，选择目的菌落 放大培养，发酵液性能测试 提高目标产物的产量 提高目标产物的纯度，减少副产物 改良菌种性状，改善发酵过程 改变生物合成途径，以获得高产的新产品 微生物生长时常需要一些代谢物，如氨基酸、维生素、嘌呤和嘧啶等化合物用于细胞组分的合成。 如果将这些代谢物的结构类似物(又称为抗代谢物或代谢颉颃物)加入到培养基中，由于它们与代谢物结构类似，能和正常代