第八章 DNA重组与转座剖析.ppt

DNA重组 —DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合。 （1）同源重组 （2）位点特异性重组 （3）转座重组 （4）异常重组 二 同源重组的分子模型 1.Holliday于1964年提出Holliday模型 （1）两个同源染色体DNA排列整齐 （2）两DNA分子同一部位两单链发生断裂引发重组 （3）断裂的单链游离末端彼此交换形成Holliday中间体 （4）通过分支迁移产生异源双链DNA分子。 （5）中间体在内切酶和连接酶作用下，形成拼接重组体和片段重组体。 RecA引起的链交换和Holliday结构的生成 第二节 位点专一性重组 细菌的特异位点重组——鼠伤寒沙门氏杆菌鞭毛蛋白H1和H2转换 20世纪60年代末期,在不同实验室发现一系列可转移的抗药性转座子 1983年Barbara McClintock被授予诺贝尔生理学与医学奖。 逆转录转座子 将DNA—DNA的转移过程称转座。 DNA—RNA—DNA的转移过程——逆转录转座。 逆转录子——一类移动因子在转座过程中需要以RNA为中间体，经过逆转录过程再分散到基因组中。 在所有高等生物的基因组构成中，存在着与逆转录病毒基因组非常相似的逆转录转座子。 逆转录转座子与简单转座子比较 1.与高频率自发突变有关； 2.刺激寄主细胞基因组发生多种形式的遗传重排； 3.插入单元两端的DNA序列在插入过程中增加3-13bp； 4.转座单元的末端含有长度为2-50bp的反向重复 5.转座过程经常与转座单元的复制同时进行； 6.转座子通过编码蛋白质作用于转座单元来对自身的转座功能进行调控。 逆转录子的结构特点 逆转录子编码逆转录作用的关键酶:逆转录酶和整合酶。 按结构特征分两类（1）与逆转录病毒类似的LTR、gag和pol基因，但无env基因。（2）不具有LTR，但有3‘polyA、 gag和pol基因。 逆转录子的生物学意义 对基因表达的影响 逆转录介导基因的重排 逆转录子在生物进化中的作用 ? IS 可以正反方向插入到DNA（宿主、质粒或某些噬菌体）， 常对插入位点后面的基因表达功能产生极性效应 a) Tn / TnA family l 具有IR、转座酶基因、 调节基因（解离酶）、抗抗生素基因 l??????? Tn1 (AmpR) Tn2 (AmpR) Tn3 (AmpR) Tn4 (AmpR StrR) Tn5 (KanR) Tn6 (kanR) Tn7 (StrR TmpR) Tn9 (CamR) Tn10 (TetR) 2.5 kb 20 kb Tn3 IR TnpA Res TnpR AmpR IR 38bp 38bp 转座酶 regulator β- 内酰胺酶 2、复合转座子 ? 两种类型 b）两端重复序列为IS的复合转座子 e.g. IS插入到功能基因两端，可能形成复合转座因子 IS IS IS IS L IS R 臂 中心区 臂 transposition ? 当两个IS组件相同时，其中任一个都可行使转座功能 ? 不同时，主要依靠一个 ? 两侧的IS既可以是IR，又可以是DR状态 （IR多） 3 转座噬菌体 Mu phage （巨型转座子 ） C repressor for A, B B 33 kd 与转座有关 A 70 kd 转座酶 U, S 毒性蛋白 attL, attR 与寄主同源，反向重复，转座必需 Gin G区倒位酶 att L C A B S U att R 150bp 1.5kb G 倒位区 38kb P gin ? 以E