医学分子生物学-上课用-9.基因功能研究的基本策略解析.pptVIP

基因敲除和 RNA 干扰 基因敲除是在基因水平将某个基因定点去除，动物整体水平。 RNA 干扰不是敲除基因，而是诱导 RNA 的特异性降解，干扰基因的表达。一般是在细胞水平。 3. dsRNA 能够诱发细胞的抗病毒反应 在哺乳动物存在干扰素相关的抗病毒体系。 dsRNA 激活 dsRNA-dependent protein kinase(PKR)，进一步诱导非序列依赖的内源性 RNA 降解。 在胚胎期细胞，上述非特异的抗病毒体系尚未形成。通过 dsRNA 可以诱导序列特异的 RNAi。 3. siRNA 与 shRNA 30bp siRNA 可以诱导 RNAi，并克服哺乳细胞的障碍。 Short hairpin RNA： 　(shRNA) 可达成稳定的基因敲除。 shRNA 表达载体系统 miRNA 表达载体系统 siRNA 设计原则 siRNA antisense 链 5’ 端稳定性较低时具有更好的效率。 必要时采用专业软件进行设计。 采用多个 siRNA 片段，并筛选其中最有效的。 有时 siRNA 的干扰效果只表现在蛋白水平。 尽可能使用较低的 siRNA 浓度，以保证其特异性。 设立补救试验可进一步确认 RNAi 与效果之间的关系。 shRNA 与 siRNA 应用的局限 在某些细胞的特定状态下，shRNA 或 siRNA 仍能够诱发细胞的抗病毒反应。 miRNA 在与