遗传学实验教学课件-g实验七聚合酶链式反应技术与应用解析.pptVIP

实验七 PCR聚合酶链式反应技术与应用 一 实验目的 理解聚合酶链式反应技术原理。 掌握聚合酶链式反应实验操作技术。 二 实验原理 PCR技术的创建：Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年, Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。 1988年Saiki等将耐热DNADNA聚合酶引入了PCR技术。 1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年，Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是20世纪80年代发展起来的一种体外核酸扩增系统。由于其快速（数小时）、灵敏（ng甚至fg级的靶DNA）、操作简便（自动化）等优点使其在短短的数年时间内即被广泛地应用于微生物学、考古学、法医学、体育等领域，并已普及到许多普通实验室。PCR技术原理是将欲扩增的DNA作模板，以和模板正链和负链互补的两种寡聚核苷酸作引物，经过模板DNA的变性、模板与引物结合复性及在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应的三步循环来扩增两个引物间的DNA片段。每一循环的DNA产物经变性后又成为下一个循环的模板DNA。这样，目的DNA的数量将以2n指数形式累积，短时间内的30（n）个循