第二章生物酶解技术ppt.ppt

细胞壁的层次 胞间层（中层）(middle lamella):果胶类物质组成，具强的亲水性和可塑性。 初生壁(primary wall)：细胞生长过程中，原生质分泌，有纤维素、半纤维素和果胶，还含有酶和糖蛋白。 次生壁(secondary wall)：细胞停止生长，原生质产生的壁物质沉积在初生壁内侧。由纤维素、半纤维素和木质素构成。分内层(S3)、中层(S2 )和外层S1 )。 细胞壁的化学组成 纤维素(cellulose): 由葡萄糖分子串联而成。 结构单位：微团(micelle) 、微纤丝(microfibre) 、 大纤丝(macrofibre) 纤维素的网络结构中交联半纤维素和果胶类物质。 目前，生物酶技术在现代中药提取中正展示着其独特的优势，引起了许多企业和科研单位的关注，并已经开始了在这一领域的探索和应用。世界上广泛开展了有关酶的性质的研究，至今已从动物，植物中发现了两千多种酶，并有两百多种酶已得到结晶。 三、影响酶活性的因素 ??酶解提取中药有效成分，均有较高收率，具有较大应用潜力，但该技术也存在着局限性。酶法提取对生产条件要求较高，为使酶发挥最大作用，并将其用于工业化时，必须综合考虑酶的浓度和底物浓度，温度，pH，作用时间等对提取物的影响。 某些物质能使酶的活性增强，成为酶的激活剂，某些物质能使酶的活性降低，成为酶的抑制剂。 再如一些金属螯合剂如EDTA（乙二胺四乙酸）等能除去重金属离子对酶的抑制作用，也可视为酶的激活剂。 第三节 生物酶辅助提取中药成分的机制 内切葡聚糖酶 纤维素酶 纤维素二糖水解酶 β-葡萄糖苷酶 β甘露聚糖酶 半纤维素酶 β-木聚糖酶 β-葡萄糖苷酶 β-甘露糖苷酶 β-木聚糖苷酶 果胶酶 聚α-1,4半乳糖醛酸的聚糖水解酶 果胶质酰基水解酶 酶解优点 第 四节 生物酶解辅助提取条件优选 一、酶辅助提取条件的优选 植物根茎类药材——纤维素酶 种子药材——纤维素酶、半纤维素酶 花类、果类——选用果胶酶 动物药材——蛋白酶 （一）酶的种类 2.复合酶的作用 由于植物组织细胞壁的多样性，有时采用复合酶，但由于复合酶的作用广泛应考虑对有效成分的多重影响。 有效成分含量明显超过单一酶 复合酶 综合作用 有效成分含量低于单一酶 复合酶解法提取三七皂苷结果比较 提取方法 皂苷含量(%) 平均 纤维素酶解法 9.46 8. 78 9.46 9.23 果胶酶酶解法 8.90 8.64 9.16 8.90 复合酶解法 11.26 11.38 10.97 11.17 （二）酶解温度 温度升高加速化学反应 但酶的本质是（ ）所以温度超过一定范围（ ）所以对同一种酶在一定温度范围内活性随（ )升高而（ ）。 对于对不同药材酶的最适合的温度可以通过实验考查来确定。 方法 固定酶的用量，作用时间，酶解液的PH值 等相同的条件，将酶解液分成若干份，分别控制不同的温度进行酶解反应，测定代表性的有效成分为考查指标，根据含量多少确定最合适的酶解温度 总黄酮的UV法测定法 　标准曲线的制备:将芦丁于120℃烘箱中烘于干燥器中冷,却后称至恒重，称取50mg用70%乙醇溶解,定容至250mL,得0.200mg/mL芦丁对照品溶液。准确吸取芦丁对照品溶液0、3.0、6.0、9.0、12.0、15.0mL于50mL量瓶中,加入5%NaNO2溶液15mL,摇匀,放置6min后加入10%Al(NO3)3溶液15mL,摇匀,放置6min后加入4%NaOH溶液20mL,再用70%乙醇定容,摇匀, 以70%乙醇为空白参比,10min后用1cm比色皿于510nm测定吸光度,得芦丁的回归方程: Y=0.0749A+0.0022(R2=0.9961)。 苦荞茎总黄酮的测定:准确称取2.50g苦荞茎叶粉,于250mL三角瓶中,加入50mL水,按试验设置的处理条件,在不同的加酶量、酶解温度和pH值条件下,酶解不同的时间,然后升温至90℃提取,离心去沉淀,用70%乙醇定容至200mL,作为待测液。取3mL待测液于50mL量瓶中,按照标准曲线的制备项下方法测定吸光度,计算总黄酮的质量,并计算总黄酮得率(总黄酮得率=