第八章转基因生物的检测技术ppt.ppt

为什么需要对转基因生物进行检测？ 怎么检测？检测的方法有哪些？ 检测中存在的问题？（可信度、下限） …………………. 中国输欧食品中被检测出非法转基因 2006年至2013年6月，欧盟食品和饲料委员会（ 欧委会）总计通报了184次中国输欧食品中被检测出非法转基因， 2012年39次，2011年29次，2010年46次，2009年15次，2008年18次，2007年9次，2006年10次 184次中，大米制品和含有大米的制品175次。 2010年3月，欧盟发现输欧大米制品中出现了克螟稻1号和科丰6号的基因。 2013年（截止6月）总计通报18批次在中国出口欧盟的大米制品中查获“非法转基因”，其中14次为米线、米饼等大米制品。 欧盟紧急出台了《对中国出口大米制品中含有转基因成分采取紧急措施的决定》，并向中方通报。欧盟27国对中国25种米制品采取强制性转基因成分检测，并依据检测结果采取退货和销毁处理措施。 检测的目标：转入基因在受体中存在的形式、部位、数量、拷贝数及表达目标蛋白质的含量等。 检测的方法： 以转入基因DNA为基础的PCR和分子杂交 以转入基因表达的蛋白质为基础的免疫学方法 基因芯片检测方法 色谱分析法 检测的标准物质：具有足够稳定性和均一性，用来校准、对测量方法进行评价或为物质定值的物质，在分析测试各行业均得到广泛应用。 检测下限和定量下限： 检测下限（ LOD ）和定量下限（ LOQ ）定义为，能够可靠检测和定量计算出转基因成分的最低限度 对转基因生物的检测一般都有国家标准或行业标准 检测一般由权威机构或国家指定的检测机构进行：中国农业科学院植物保护研究所、南京农业大学、中国水稻所、华南农业大学、浙江大学、吉林省农业科学院 目前，国内农业部公告953号（转基因检测标准）：抗虫转基因水稻、抗虫转基因玉米、耐除草剂油菜 检测技术均以PCR为主 一、目标序列（基因或蛋白） 目标序列包括转入基因的DNA序列及其表达的相应蛋白质序列。 转基因检测中目标序列的选择是保证 PCR 反应特异性的最重要因素。 目标序列通常是构建的转基因载体的一部分，比如启动子、终止子、基因，或者这些元件之间的连接序列。 这些元件可能来源于天然物种，可能存在于不止一种 GMO 中，在不同 GMO 中的拷贝数也不尽相同。它们在多种 GMO 中的组合方式有可能相似。因此，检测方法的选择要与目的一致。近来发展起来的包括 event-specific 在内的技术，对于转基因成分的定性和定量分析十分有效。 PCR 技术为基础的 GMO 检测根据其特异性的不同至少可以分为四类。每一类都与其所扩增 DNA 片段的组分有关。 一种 GMO 就意味着发生了一次特异的转化事件。比如， Mon809 和 Mon810 转基因植株同属玉米，而且通过相同的质粒进行转化（ pV-ZMBK07 ） ，但却被视为两种不同的 GMO 转化事件。 转化在某些时候意味着生物基因组序列的一部分被删减或替换，但通常的意思是将外源基因插入受体基因组中去。 转基因载体由几个部分组成，一般包括目的基因、启动子序列（提供启动信号）和终止子序列（提供基因表达的终止信号），另外还有一些克隆载体本身的序列。 ①筛查法 大部分转基因植物是通过含有烟草花叶菜花叶病毒（ CaMV ） 35S 启动子 （ P-35S ）和 / 或 CaMV 35S ( T35-S ) 或者是 农杆菌 胭脂碱（ Agrobacterium tumefaciens nopaline ）合成酶终止子（ T-Nos ）的载体所转化的。 最常见的克隆载体是 pBR322 质粒及其衍生物（例如 pUC19 ），其中含有氨苄青霉素或新霉素 / 卡那霉素（ nptII ）抗性基因以用于筛选。 所以，通过 P-35S 、 T-35S 、 T-Nos 、 bla 或 nptII 这四种标志物来筛查遗传修饰材料的方法已得到广泛应用 。 ②基因特异的方法 目的基因可能源自天然，但通常会被轻微的修饰，比如序列缩短或密码子改变 。并且，能获取的基因的数量要比启动子和终止子多很多。因此，以目的基因为特征序列的 PCR 方法要比筛查法更具有特异性。 通常用基因特异法得到的阳性信号，表明转基因来源的 DNA 是存在的，在许多情况下甚至还可以识别 DNA 是从哪个 GMO 中得到的。 该法把检测目标放在功能元件的连接部分，比如启动子和特异基因之间的序列。通过此方法得到的阳性信号只会出现在含有转基因的材料中，而且比基因特异法更易识别出含有转基因序列的来源材料。 一种构建载体可能已经转到多个转化事件中，或者即将转到其它品种里。或者比如， pV-ZMBK07 和 pV-ZMBK10 分别转入下列转基因玉米： Mon809 （含一个拷贝）， Mon81