基因工程1.2预习课件重点.ppt

①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 启动(终止)转录 启动(终止)翻译 作用 位于DNA上 位于mRNA上 位置 DNA片段 三个相邻碱基 本质 启动(终止)子 启始(终止)密码子 什么是转化？ 将目的基因导入植物、动物、微生物细胞的方法分别有哪些？ 三.将目的基因导入受体细胞 转化： 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的方法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 感受态法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 原核细胞 1.将目的基因导入植物细胞----农杆菌转化法 适用于 单子叶植物 基因枪法 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 显微注射技术 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理法 四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 1、鉴定——分子水平的鉴定 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 目的基因 基因探针： 指用荧光或放射性同位素标记的DNA分子 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 1、鉴定——分子水平的鉴定 变性 方法—— 分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 1、鉴定——分子水平的鉴定 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 抗原－抗体杂交法 DNA-mRNA分子杂交法 DNA分子杂交法 受体是否具有 转基因特征 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 四、目的基因的检测与鉴定 2、鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、化学方法人工合成 复制原点 +启动子+目的基因 + 终止子 + 标记基因 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、Ca2+处理法 DNA分子杂交、DNA-mRNA分子杂交、抗原—抗体杂交技术 个体生物学水平鉴定 课堂小结 A就是腺嘌呤，T就是英文的three，P是指phosphate 即磷酸。 ATP，GTP，CTP，TTP 可以统称为 NTP d指的是deoxy 即脱氧。 dNTP的全称即 三磷酸脱氧核苷酸 * * * * DNA 基因工程的工具 限制酶 来源：主要存在于原核生物中 作用：切断磷酸二酯键 结果：产生平末端和黏性末端 DNA连 接 酶 作用：连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 体 具备的条件 对受体细胞无害 能自我复制并稳定存在 有一个多个限制酶切位点 有标记基因 常用载体：质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 1.2　基因工程的基本 　　操 作 程 序 基因工程的目的基因－－ 　　从供体转移到受体的基因，主要指编码蛋白质的结构基因。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 1、获取目的基因的方法有哪些？ 一、目的基因的获取 2、什么叫基因文库，它包括哪些种类？ 3、用PCR技术扩增