聚合酶链式反应重点.pptVIP

PCR 的基本原理 其原理类似于DNA的体内复制， 在试管中的DNA的体外合成。 Denaturation（变性） template DNA (dsDNA) —— 95℃±——denaturation ——ssDNA Annealing（退火） Primer（引物）：两条寡核苷酸链；分别与待扩增的目标片段两端的序列互补。 Extension（延伸） 新合成的链又可作为下轮循环反应的模板。 尽管PCR扩增DNA非常有效，但目的DNA序列的指数扩增并不是一个无限制的过程。 在正常的反应条件下，30次循环，酶的催化反应趋于饱和平台效应 (Plateau) “平台效应”出现的迟早还取决于酶的性能、模板DNA的拷贝数、dNTP浓度等多种因素。 PCR反应体系与反应条件 primer 引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。 2. 保证引物中G-C比例为50%±15%，ATGC最好随机分布。 避免两条引物间或引物内部互补，特别是3’端的互补。 4. length20bp Ta（退火温度）=(4×G/C + 2×A/T – 5 °C ); length20bp Ta=62.3 °C+0.41 °C *(%GC) - 5 °C 保证每个引物的Tm值相匹配。 5.