光谱技术与电化学最新分析报告.ppt

电流型酶标记免疫传感器的工作原理 第一代酶标记电流型免疫传感器以非电活性物质如O2作为氧化还原的电子受体为代表。先用竞争法或夹心法葡萄糖氧化酶或过氧化物酶标记物结合到膜或电极上,再通过氧电极测量葡萄糖转化为葡萄糖酸中消耗的氧,或过氧化氢分解中产生的氧。 第二代酶标记电流型免疫传感器使用电活性物质替代分子O2 , 这些电活性物质包括二茂铁衍生物、苯醌、氯醌、亚甲基蓝、血红素等。 基于磷脂修饰碳纳米管作为电化学标记物的电化学免疫分析方法的原理图 Angew.Chem.Int.Ed.,2009,48,9862。 原理：电化学DNA传感器利用单链DNA 作为敏感元件，通过共价键合或吸附等方法固定在电极表面,加上识别杂交信息的电活性杂交指示剂共同构成的检测特定基因的装置。 4. DNA生物传感器 因此我们在应用 电化学DNA传感器进行检测时, 可以归纳为以下四个步骤： ① 单链DNA 的固定，制成单链DNA 探针； ② 分子杂交反应的完成，在最佳条件下形成DNA 杂 交分子； ③ 选择合适的电活性杂交指示剂完成双链DNA 的表达； ④ 杂交信号的电化学测量,根据所选择电活性杂交指示剂的不同，产生相应的电化学信号,可将电流、电压或电导做为测定信号。 电活性杂交指示剂 杂交指示剂担负着电化学DNA 传感器的信号传递作用,是电活性物质,能选择性地区分单链DNA 与杂交后双链DNA ,且其还原电势处于DNA 的电化学范围之中( + 1. 2V～ -0. 9V ) ,DNA 通过远程电子传递使杂交指示剂与电极发生电子交换而完成电化学反应，使得杂交信号转化为电化学信号。 电化学DNA 传感器的制备 单链DNA 的固定方法有很多种,已用的基底电极有汞电极、固体电极如金电极、玻碳电极、石墨电极、碳糊电极等,根据固定方式的不同，可将制备方法分为以下几种: (1) 吸附法 (2) 共价键合法 (3) 自组装法 (4) 组合法 (1) 吸附法 将单链DNA 直接滴涂或是在一定电位下富集吸附到电极表面。 吸附法相对简单,但是结合的力度和方向性较差,单链DNA 在溶液中有可能脱附或结构扭曲而不易发生正确的杂交反应。 (2) 共价键合法 将电极表面预处理后产生各种功能的活性键合基团,再与单链DNA 发生有机反应,通过共价键的形成把单链DNA 固定在电极表面。 这是单链DNA 分子固定的一种常用方法。 (3) 自组装法 根据分子的自组装作用,在电极表面形成高度有序的单链DNA 单分子层。通常是利用巯基化合物修饰单链DNA 后再组装于金电极的表面，形成单链DNA单分子层。 这种方法制备的单链DNA 探针，表面结构高度有序、稳定性好、易于发生杂交反应,但对巯基修饰过程要求较高。 (4) 组合法 将化学修饰剂与电极材料如石墨粉混合后制备组合修饰电极,再利用单链DNA 与组合修饰剂的相互作用而固定 在电极表面。 这种方法制备的单链DNA电极修饰层相对稳定,易于杂交反应的发生,但其再生能力较差,使用次数有限。 * * 紫外吸收光谱：分子在入射光的作用下发生了价电子的跃迁，吸收了特定波长的光波形成。结构鉴定和定量分析。 辐射光子的能量应与振动跃迁所需能量相等，即分子所吸收红外辐射的频率恰等于分子振动频率整数倍。2、辐射与物质之间必须有耦合作用，即要求分子振动必须伴随偶极矩的变化。 原子核等位于强磁场中时，自旋能级裂分，无线电波照射时，产生核磁共振现象。在外磁场中，原子核能级产生裂分，由低能级向高能级跃迁，需要吸收能量。 能级量子化。射频振荡线圈产生电磁波。 质谱分析原理是将被测物质分子电离成各种不同质荷比的带电粒子，然后在电场、磁场的组合作用下，使这些带电粒子按质荷比大小在空间或时间上产生分离，并测量离子峰的强度，以此获得化合物的相对分子质量及其他有关结构信息 * 有充满电子的原子轨道所形成的较低能量的能带，叫做满带，由未充满电子的原子轨道所形成的较高能量的能带叫做导带。一般金属的导带都是未充满的。 由于金属中的电子能带结构与一般分子中的分子轨道不同，其可见紫外光谱的形成机理也有差别。金属纳米粒子中，表面价电子处于导带中，比较自由，形成类似于自由电子的体系，可以把这种由相对固定的原子核和相对自由的外层价电子构成的电中性体系看成是一种等离子态。紫外可见光照射到金属纳米粒子表面，光电场使自由电子发生相应的振动，电子云相对核发生了位移，电子云和核之间的库伦力促使其恢复原状，形成电子云相对于核的振荡，这是一种集群振荡，称为偶极等离子振荡。当入射光的能量与电偶极子的振动频率相同时，这个偶极子会发生共振吸收，形成吸收峰。 偶极子的共振频率与纳米粒子的电子密度、有效电子质量、电荷分布的形状和尺寸有关，故