仪器讲稿(液相)课程.ppt

高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography,HPLC 内容提要 1 高效液相色谱法的特点 2 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 3 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 4 液相色谱法的固定相 5 液相色谱法流动相 6 高效液相色谱仪 7 高效液相色谱分离类型的选择 8 高效液相色谱法应用实例 9 液相制备色谱 10 毛细管电泳 采取措施： 1）液-液分配色谱：薄的固定相层；吸附、排阻、离子交换色谱：小的颗粒填料。 2）采用扩散系数大的液相固定相。 3）减小流动相的流速，改善传质。 1、在液相色谱中，提高色谱柱柱效的最有效途径是（ ）。 A 减小填料粒度 B 适当升高柱温 C 降低流动相的流速 D 增大流动相的流速 2、高效液相色谱中，可以忽略不计的影响色谱峰扩展的因素是（ ）。 A 涡流扩散项 B 纵向扩散项 C 传质阻力项 D 柱外展宽 3、在液相色谱中，纵向扩散项Hd＝B/u较小，通常可以忽略不计。（ ） 4、要提高液相色谱分离的效率，必须提高柱内填料填装的均匀性和________以加快传质速率，其中_________是提高柱效的最有效途径。 3.分离机制 a.双柱型：化学抑制型离子色谱法。 b.单柱型：非抑制型. 问题：何谓化学抑制型离子交换色谱及非抑制型离子色谱？试述它们的基本原理。 练习 1.?如果样品的相对分子量在200到2000之间，一般可考虑使用（ ）进行分离。?? A.?气相色谱法，?B.?空间排阻色谱法，?C.?液相色谱法，?D.?以上都不是。 2、下列用于高效液相色谱的检测器，（ ）检测器不能使用梯度洗脱。 A、紫外检测器 B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器 3.?对于正相液相色谱法，是指流动相的极性（ ）固定液的极性。? ?A.?小于，?B.?大于，?C.?等于，?D.?以上都不是。?? 4.?对于反相液相色谱法，是指流动相的极性（ ）固定液的极性。? ?A.?小于，?B.?大于，?C.?等于，?D.?以上都不是。?? 5、液相色谱的流动相又称为淋洗液，改变淋洗液的组成、极性可显著改变组分分离效果。（ ） 6.?液相色谱法中使用的梯度洗提操作是指在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的________________；而气相色谱法中使用的程序升温操作是指柱温按预定的加热速率随时间作________________增加，这些操作的目的都是为了提高分离效果。 7、离子色谱法通常以______________为通用检测器，为了消除流动相中强电解质背景离子对检测器的干扰，设置了___________。 8、相对分子质量较低，挥发性较高的试样，适于用气相色谱法，相对分子质量为200~2000适于用________色谱法，相对分子质量大于2000的则宜用______色谱法。 9、反相分配色谱适于极性化合物的分离，正相分配色谱适用于非极性物质的分离。 （ ） 10、液-固色谱法适用于分离________________________________________试样，对具有__________________________________________有较高的选择性。 11、化学键合固定相的分离机制是______过程和________过程的双重机制兼而有之的过程。 在离子对色谱色谱中,样品组分进入色谱柱后,组分的离子与对离子相互作用生成中性化合物,从而被固定相分配或吸附进而实现分离的.各种有机酸碱特别是核酸、核苷、生物碱等的分离是离子对色谱的特点。 空间排阻色谱是利用凝胶固定相的孔径与被分离组分分子间的相对大小关系,而分离、分析的方法。最适宜分离的物质是： 另外尚有手性色谱、胶束色谱、环糊精色谱及亲合色谱等机理。 5. 在液-液分配色谱中，为什么可分为正相色谱及反相色谱？ 解：采用正相及反相色谱是为了降低固定液在流动相中的溶解度从而避免固定液的流失。 6.何谓化学键合固定相?它有什么突出的优点? 解:利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面形成的固定相称为化学键合固定相. 优点: 固定相表面没有液坑,比一般液体固定相传质快的多. 无固定相流失,增加了色谱柱的稳定性及寿命. 可以键合不同的官能团,能灵活地改变选择性,可应用与多种色谱类型及样品的分析. 有利于梯度洗提,也有利于配用灵敏的检测器和馏分的收集. 7. 何谓化学抑制型离子色谱及非抑制型离子色谱?试述它们的基本原理. 解:在离子色谱中检测器为电导检测器,以电解质溶液作为流动相