大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化.pptx

感受态的制备和质粒的转化;材料及方法 CaCl2法制备感受态的原理 感受态细胞的制备 质粒的转化 转化子的筛选 ; 材料及方法 菌种 ：大肠杆菌BL21菌株 质粒：pGEX-6P-1 感受态制备方法：CaCl2法 转化方法：热激法 ;CaCl2制备感受态的原理: 细菌处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促使细胞吸收DNA复合物。;感受态的制备;离心弃上清;质粒的转化;转化子的筛选;转化率 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此平板中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下： 转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 转化频率（转化子数/每ug质粒DNA）＝转化子总数/质粒DNA加入量（ug） 转化子总数＝N×1×200/200＝N 转化频率＝N/10-4（0.1 ng=10-4?ug）＝N×104`