课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段资料.ppt

1、 PCR（多聚酶链式反应）技术： 2、原理： 4.其它组分添加 DNA上清液10μL 10倍扩增缓冲液 5μL 25mmol/L MgCl2溶液3μL 20mmol/L4种脱氧核苷酸的均匀混合液1μL Taq聚合酶1μL 两种引物各0.5μL 蒸馏水29μL 预变性 94℃，5min 30次重复反应 94℃，30s 55℃，30s 最后一次 94℃，1min 55℃，30s 72℃，1min 72℃，1min 5.PCR反应 变性 复性 延伸 6.PCR产物检验 分光光度计法 取2μL PCR DNA溶液，加入98μL H2O，使DNA５０倍稀释 以蒸馏水为对照，在260nm处测样品DNA的光吸收值 根据公式计算DNA含量 DNA含量（μg/mL）= 50×（260nm度数）×稀释倍数 结果分析与评价 　　根据公式计算DNA片段的含量比扩增前增加了了多少倍。 相关链接 琼脂糖凝胶电泳法检测DNA含量 1.配制浓度为１％的琼脂糖凝胶，倒入电泳槽中，插好梳子 2.向电泳槽中加入电泳缓冲溶液，移去梳子 3.在DNA中加入载样缓冲液，混匀后，滴加到样品孔中 4.接通电源，电泳20-40min + - 5.EB 溶液染色，在紫外仪上观察电泳带及其位置，判断扩增情况 观察电泳带的粗细以及分布评价扩增的效