色谱理论重点剖析.pptVIP

色谱分析Chromatographia Analysis 主讲教师：陶益 联系方式 南京中医药大学 2013.9 教学进度与课程安排 实验安排 第一章???色谱基础理论 HPLC发展史 1966年 第一只小体积紫外检测器 1967年 第一台自动化液相色谱仪 1971年 研制成功键合相填料 80年代初 二级管阵列检测器 80年代末 HPLC-MS、HPLC-NMR 2004年 超高效液相色谱系统 色谱法的分类 按流动相与固定相的分子聚集状态分类 气相色谱法（气-固，气-液） 液相色谱法（液-固，液-液） 超临界流体色谱（SFC） 按操作形式分类 柱色谱，平面色谱，逆流分配 按色谱过程的分离机制分类 吸附色谱（adsorption ~ ） 利用吸附能力的差别； 分配色谱（partition ~） 利用分配系数的差别； 空间（分子）排阻色谱（steric exclusion ~）或称凝胶色谱法（gel ~） 利用被测物分子大小不同而导致的渗透系数差异。 经典液相色谱和HPLC的区别 纵向扩散 B/u项为纵向扩散项 在液相中影响小 在低流速中影响大 涡流扩散 A为涡流扩散项 使用均一的载体 仔细填充柱子 样品组分在气、液两相中分配，经溶解、扩散、平衡及转移的整个过程称传质过程。 常数C称为传质阻抗系数，为固定相和流动相的传质阻抗系数之和：C= Cs+ Cm，因Cm很小， C≈ Cs，其与固定相厚度有关。 传质阻抗 液相色谱速率理论方程式 H=A+B/u+Cmu+Csmu+Csu 组分在流动相中的扩散系数与流动相的分子量平方根成反比。由于流动相为液体，分子量较气体大得多，因此纵向扩散项 B/u可忽略。 Csmu为静态流动相传质阻抗。将三个传质阻抗系数（ Cmu、Csmu、Csu ）合并，得： H=A +C u 可以近似地认为流动相的流速与板高成直线关系，流速增加，柱效降低。一般采用1ml/min。 流速对塔板高度的影响 3 1 2 U最佳 H U U最佳 GC HPLC 1—B/u 2-Cu 3--A 色谱分析法又称色谱法或层析法，是一种物理或物理化学的分离分析方法，该法利用某一特定的色谱系统（高效液相色谱 或气相色谱系统）进行分离分析，主要用于分析多组分样品。一个色谱系统包含两相，即固定相和流动相。在一个特定色谱 系统中，多组分样品的各组分在固定性和流动相之间分配的浓度是不同的，即各组分具有不同的分配系数，当两相相对运动 时，分配系数较大的组分色谱保留较强，在色谱系统中移行速度较慢，反之，分配系数较小的组分色谱保留较弱，在色谱系 统中移行速度较快，不同组分在两相之间通过反复多次的分配，最终得到分离。 1966年，哈瓦施 （Horvath）研制了第一只小体积紫外检测器 1967年，哈瓦施 （Horvath）研制了第一台自动化 液相色谱仪 1971年，科克兰（Kirland）研制成功键合相填料 80年代，出现二极管阵列检测器 80年代末，出现HPLC-MS和HPLC-NMR等色谱光谱联用技术 2004年，Waters公司推出超高效液相色谱系统 在色谱法中，流动相可以是气体、液体或超临界流体，固定相可以是固体或液体。 按照固定相和流动相的状态，分为以下三类即气相色谱法、液相色谱法和超临界流体色谱法 1、气相色谱法以气体作为流动相，按固定相的不同可以分为气-固色谱法和气-液色谱法，气-固色谱法的固定相 为固体吸附剂，气-液色谱法的固定相为涂在担体或毛细管壁上的液体。这里的担体（见课本P6)指一种化学 惰性的，多孔性的固体微粒，能提供较大的惰性表面，使固定液以液膜状态均匀地分布在其表面。 2、液相色谱法以液体作为流动相，根据固定相的不同，分为液-固色谱法，固定相为固体吸附剂，液-液色谱法， 固定相为涂在固体载体上的液体。 3、超临界流体色谱是指用超临界流体作为流动相，超临界流体是介于气体和液体之间的流体，可以理解为一种稠密的气态 物质，密度接近液体，具有溶解性强、扩散性能好的优点。固定相一般为固体吸附剂（如硅胶）或键合到载体上的高聚物。 按操作形式来分，将固定相装于管柱内构成色谱柱，色谱过程在色谱柱内进行，这叫做柱色谱法 如果色谱过程在固定相构成的平面内进行，那就称为平板色谱法。 而逆流色谱不需要任何固态的支撑物或载体 ，是一种液液分配色谱技术 。 吸附色谱以吸附剂为固定相，靠样品组分在吸附剂上物理吸附能力的差异进行分离。 分配色谱以液体为固定相，利用样品组分在固定相中的溶解度不同，所造成的两相间分配 系数不同差别而进行分离。 分子排阻色谱，以凝胶为固定，根据高分子样品的分子体积大小的差异进行分离。 离子交换色谱以离子交换剂为固定相，