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DNA 测 序 DNA Sequencing * 龚 玲 2013-06-29 内容简介： DNA测序概念 DNA测序目的 DNA测序的一般方法 DNA测序的应用 …GCTTCTTCCTCATTTTCTCTTGCCGCCACCATGCCGCCACCA TCATTTTCTCTTGCCGCCACCATGCTTCTTCCTCATTTTCTCT CCACCATGCCGCCACCACGCCACCATGCTTCTTCCTCATCTC GCTTTCTTGCCGCCACCATGCCGCCACCGCTTCTTCCtTCTCT… DNA测序即核酸DNA分子一级结构的测定，是现代分子生物学一项重要的技术。 测定未知序列； 确定重组DNA的方向与结构； 对突变进行定位和鉴定； 比较研究。 DNA测序目的： DNA测序的一般方法： 双脱氧测定法(Sanger法)； 化学测序法(Maxam-Gilbert法)； 荧光自动测序仪。 1、双脱氧测定法 双脱氧法或酶法利用DNA聚合酶合成单链DNA模板的互补拷贝。 读出模板互补序列 dNTP 凝胶电泳 较大片段 较小片段 ddGTP ddATP ddCTP ddTTP 反应混合物 Klenow酶 未知序列的单链DNA 读出待测序列 CTGACTTCGACAAAGAA 5′ 3′ A C T G ddG ddG ddG ddG GACTGAAGCTGTT 3′ 5′ CTGACTTCGACAA 5′ 3′  2、化学测序法(Maxam-Gilbert法) G 反应:DMS 使鸟嘌呤的 7 位氮原子甲基化，其后断开第 8 位碳原子和第9 位氮原子间的化学键，哌啶置换了被修饰鸟嘌呤与糖的结合。 G+A 反应:甲酸使嘌呤环上的氮原子质子化，削弱了腺嘌呤脱氧核糖核苷酸和鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸中的糖苷键，然后哌啶置换了嘌呤。 T+C 反应:肼断开了嘧啶环，产生的碱基片段能被哌啶所置换。 C 反应:在NaCl存在时，只有C 才能与肼发生反应，随后被修饰的胞嘧啶被哌啶置换。 3、荧光自动测序仪同位素标记到荧光标记,平板电泳到毛细管电泳 多色荧光标记 毛细管电泳 单色荧光标记 平板电泳 同位素标记 平板电泳 A C G T A C G T 测序图谱 T A TTG CAT TG TC TGCATTG T C T DNA测序仪示意图 computer analysis 凝胶中DNA移动方向 样品槽 激光器 输入光学系统 成象透镜 聚焦透镜 高灵敏度相机 旋光镜/棱镜组件 DNA自动测序结果 DNA测序技术的应用 分析基因组核苷酸排列序列； 分析基因序列； 基因定点诱变的基础 ; 基因工程载体构建中DNA序列定位和排序的基础； 确定DNA序列中蛋白质的编码区。 谢 谢 THANK YOU!