DNA重组技术的基本工具林春娘.ppt

目 录 专题1 基因工程 专题2 细胞工程 专题3 胚胎工程 专题4 生物技术的安全性和伦理问题 专题5 生态工程 基因工程的定义 转基因抗虫棉 转基因动物 基础理论和技术的发展催生了基因工程 技术发明使基因工程的实施成为可能 1.基因转移载体的发现 2.工具酶的发现 3.DNA合成和测序技术的发明 4.DNA体外重组的实现 5.重组DNA表达实验的成功 6.第一例转基因动物问世 7.PCR技术的发明 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 1.限制性核酸内切酶（限制酶） ——“分子手术刀” 切割后的形式：2种，分别为：黏性末端和平末端 2. DNA连接酶－－“分子缝合针” (2)种类 ①E·coli DNA连接酶：只能缝合双链DNA片段互补的 黏性末端 。 ②T4DNA连接酶：既可缝合DNA片段互补的黏性末端，又可缝合双链DNA片段的 平末端 。 3 .基因进入受体细胞的载体－“分子运输车” 一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中；二是利用它在宿主细胞内进行大量的复制。 1）质粒 （2）λ噬菌体的衍生物 （3）某些动植物病毒 本节内容小结： 1.知识梳理： DNA重组技术的基本工具： ①限制酶（分子手术刀）：识别特定的核苷酸序列并切割两核苷酸之间的磷酸二酯键； ②DNA连接酶（分子缝合针）：连接两核苷酸之间的磷酸二酯键； ③基因进入受体细胞的载体（分子运输车）：最常用的是细菌质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A.限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 * * 现代生物科技专题 文昌中学 生物 林春娘 专题1 基因工程 ？ 什么是基因工程？（p1) 基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。也就是按照人们的意愿，把一种生物的个别基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工。 原理 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 基因工程的别名 基因重组 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 转基因食用油 ？ 基因工程有哪些应用呢？ 转入苏云金芽孢杆菌的一个抗虫基因，是中国目前最主要的转基因作物。 转基因鼠和普通小鼠 “多利’羊 转基因夜光猫 ? 基因工程是怎样发展起来的呢？（p2） 基因工程是在生物化学，分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的，正是这些学科的基础理论和相关技术的发展催生了基因工程。 20世纪中叶，基础理论取得了重大突破 1.DNA是遗传物质的证明 2.DNA双螺旋结构和中心法则的确立 3.遗传密码的破译 科学、技术、社会的互动，不断调整着人类与自然界的关系，推动着文明的进展。 ? 基因工程的操作水平是在DNA水平上进行的，那么该如何实现在这个微观水平上的操作呢？ 基本工具 1.1DNA重组技术的基本工具 DNA重组技术是属于基因工程的一个具体操作，它是基因工程中最核心的技术 ？ 在DNA重组的操作过程中，至少需要哪些工具？ 分布：主要在原核生物中 作用特点：专一性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点 切点：磷酸二酯键 举例：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 基因操作的工具 限制性酶是一大类酶，不是一种酶。限制酶所识别的序列，大多数限制酶的识别序列由6个碱基组成，也有少数限制酶的识别序列由4.5或8个核苷酸组成，无论多少个碱基，被限制酶切割的序列，都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的—回文序列。 限制酶是一类酶还是一种酶？ 黏性末端：是限制酶在识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开形成的，如图 平末端：是限制酶在识别序列的中心轴线处切开形成的，如图 用同一种限制性酶处理不同DNA片段，会形成同样的黏性末端，可进行重组。 限制酶在原核生物中的作用是什么？细菌中限制酶会不会切断自身DNA？为什么？ 答案：原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是原核生物的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，