DNA重组技术的基本工具上课课件.ppt

磷酸二酯键 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 * 抗虫棉 普通棉 回忆旧知识 重组DNA转移到动物受精卵中。 将人的生长激素基因注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 原理 结果 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 基因重组 什么叫基因工程？ 基因工程操作的四个基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫基因) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 转基因棉花植株 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 关键步骤 1.ONE 提取基因 2.TWO 基因与运载体DNA连接 3.THREE 基因导入棉花植株 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 运载体 一、限制性内切酶 “分子手术刀” 每种酶识别某种双链DNA分子特定的核苷酸序列，使每一条链中两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(具专一性) 主要是从原核生物中分离纯化出来的，切断外来的DNA ，在内部进行，故名限制性内切酶。 4000种 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 T 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 黏性末端是如何形成的？ 大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 黏性末端 黏性末端 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的 核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端？ 平末端是如何形成的？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成 重组的DNA分子了? 实际还不够,还需要DNA连接酶进行连接。 思考题： 二、 DNA连接酶—— “分子缝合针” 切断的DNA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？ 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 二、DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶连接黏性末端之间的磷酸二酯键，形成重组的DNA分子。 E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键 DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ 运载体： 常用主要有两类： 1）细菌的质粒(绝大多数是环状DNA分子) 2）噬菌体或某些动植物病毒 三、基因进入受体细胞的载体 —“分子运输车” 能带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 标记基因的作用鉴别受体细胞中是否含目的基因。如将来可用含青霉素的培养基鉴别，将含目的基因的细胞筛选出来。 运载体 1.能够在宿主细胞内复制并稳定保存； 2.具有多个限制酶切点以便与外源基因相连； 3.具有标记基因，如抗四环素的抗性基因。便于进行筛选． 运载体的作用有哪些？ 一：将外源基因转移到受体细胞中。 二：利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行复制。 教材P7思考与探究 1 *