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HBV DNA 定量检测 乙型肝炎病毒（HBV） 生物学性状 HBV属于嗜肝DNA病毒科正嗜肝DNA病毒属， 具有3种形态结构： 大球形颗粒：球形，具有感染HBV完整结构颗粒，42 nm，双层衣壳。 Dane首先在乙肝感染者血清中发现，所以又称Dane颗粒。 小球形颗粒：球形，为HBVsAg，22 nm，由HBV过剩的衣壳装备而成。 管形颗粒： Dane颗粒结构 Dane 颗粒（完整的病毒）形态 HBV的基因组结构 HBV的抗原组成 表面抗原HBsAg -------抗HBs 核心抗原HBcAg -------抗HBc e抗原HBeAg -------抗HBe 表面抗原HBsAg 存在于三型颗粒中 是HBV感染的主要标志 分亚型（a, d/y, w/r; adw,adr,ayw,ayr） 产生抗-HBs Pre S1、Pre S2及抗- Pre S1和抗- Pre S2 PreS1 和 PreS2 抗原的检测作为病毒复制的指标 抗preS抗体阳性常见于急性乙肝的恢复期，表示病毒正在或已经被清除 抗-HBs 急性感染后期或HBsAg 消失后出现 空白期 或 窗口期 抗-HBs为保护性抗体（中和抗体） 乙肝痊愈（临床）或免疫成功（接种疫苗）的标志 核心抗原HBcAg 仅存在于Dane颗粒中，刺激机体产生抗HBc（IgG、IgM） 可在感染的肝细胞核心部位的表面存在 表明病毒在复制 到血液中即被降解为HBeAg 一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc 抗-HBc 对机体无保护作用 抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志，表明病毒在复制 抗HBc-IgG：持续时间长 凡“有过” HBV感染者均可阳性，并可终身伴随 e抗原HBeAg 仅存在于Dane颗粒中 HBeAg是HBcAg的降解产物 游离存在于血液中 为病毒复制及强传染性的指标 产生抗－HBe，是预后良好的征象 ELISA （俗称“两对半”）检测乙肝指标 HBsAg、抗HBs HBeAg、抗HBe 抗HBc （HBcAg） 检测HBV DNA的意义 1.直接反应HBV复制状态及传染性的最佳指标; 2.动态观察外周血清中一定量可真实反映乙型肝炎病毒感染、复制及病程变化，可用于判断乙肝感染的严重程度和传染性; 3.指导临床治疗和评估抗病毒药物疗效, 为及时调整药物剂量、确定时间提供依据; 4.监测孕妇和胎儿的HBV的感染情况; 5.指导母乳喂养; 6.HBV DNA与C3、C4、ALT、PA等多项生化指标相关，联合检测，指导诊断、治疗和预防。 FQ-PCR检测的优势 灵敏度高可以达到 pg 级而 ELISA 只能检测 ng级，可以检测包括乳汁的其他低含量的标本; 不受病毒变异影响，而前C和S变异后ELISA难以检测; 荧光定量PCR 技术采用闭管检测, 无须凝胶电泳, 避免了交叉污染,实现了对HBV DNA 的定量测定, 其实时监测技术使药物选择和疗效观察成为可能; 漏检率低。 ELISA检测灵敏低的原因及局限 标本中病毒颗粒少; ELISA法受其自身敏感性和特异性的限制; HBV S和前C基因区出现位点突变导致HBsAg和HBeAg表达缺陷。 影响因素多,如加样时间,试剂平衡时间,样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果,使弱阳性样本漏检。 急性感染的窗口期; HBsAg检测方法灵敏度不足;血清亚型的漏检等。 乙肝三系主要模式与HBV DNA的关系 目前, 有关HBV 宫内感染的诊断尚无统一标准； 理论上以检测新生儿肝组织HBV DNA 最为理想, 但实际上难以实施, 新生儿脐带血可能在分娩过程因子宫收缩、挤压等因素迫使母血通过胎盘渗入而污染, 不能真实地反映HBV 宫内感染的情况, 不宜作为诊断标准； 文献报道以新生儿出生后24 h 内主动和被动免疫前, 股静脉血HBsAg 和/ 或HBV DNA 阳性作为宫内感染的诊断标准。 孕妇血清HBV DNA含量≤105 拷贝/ml是是否发生宫内感染的安全阈值,宫内感染主要发生在血清HBV DNA含量≥106 拷贝/ml的孕妇。 乳汁HBV DNA的检测 文献结果表明:血清中HBsAg、HBeAg 与乳汁HBV DNA 的检出并不完全一致; 乳汁中HBV含量较低ELISA检测容易造成漏检; FQ-PCR直接检测乳汁中HBV DNA 是最为可靠的方法指导母乳喂养。 * *