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第三章 微生物制药 一、微生物药物的几个相关基本概念 二、微生物药物的分类 三、微生物药物的应用 四、药源微生物及微生物药物的筛选技术 五、微生物药物的发酵生产技术 六、微生物药物的分离、精制和鉴别 七、核酸、核苷和核苷酸类药物 八、药用氨基酸 微生物药物的发展 1、1929年英国医生Fleming第一个发现了抗生素青霉素 目的——将产生菌的一些有益变异，通过不断的筛选和培育，为研究和生产提供更多合乎需要的高产优质新菌种。 四核酸、核苷和核苷酸类药物 由某些动物、微生物的细胞中提取出的核酸(包括核苷酸和脱氧核苷酸)，或者用人工合成法制备的具有核酸结构(包括核苷酸和脱氧核苷酸结构)同时又具有一定药理作用的物质 广义的核酸药物可包括核苷酸药物、核苷药物及含有不同碱基化合物的药物 1核酸药物具有多种药理作用，按其作用特点可分为： (1)抗病毒剂----三氮唑核苷、无环鸟苷等，临床上用于抗肝炎病毒、疱疹病毒及其他病毒； (2)抗肿瘤剂----氟尿嘧啶（治疗消化道癌），阿糖胞苷（各类急性白血病）等； (3)干扰素诱导剂----聚肌胞（抗肝炎病毒、疱疹病毒）等； (4)免疫增强剂----抗病毒及抗肿瘤的辅助治疗； (5)供能剂，用于肝炎、心脏病等多种疾病的辅助治疗。药用腺苷三磷酸(ATP)原粉可从酵母RNA为原料制备，也可通过人工合成及发酵生产。 2 核苷酸的制备方法 （一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 1、酶解法制备脱氧核苷酸 桔青霉产生5`-磷酸二脂酶 红酵母产生3`-磷酸二脂酶 2、酶解法制备戊糖核苷酸 我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生产单核苷酸，日本年产呈味核苷酸（肌苷酸和鸟苷酸）3000吨，其中60%是使用酶解法生产的。 3、双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I＋G） 呈味核苷酸的主要品种是肌苷酸钠和鸟苷酸钠，商品名简称为（I＋G），用核酸酶Pl降解RNA可获得GMP和AMP，其中AMP经脱氨生成IMP。 4、菌体自溶法生产核苷酸 磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA可产生5′-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法生产5′-核苷酸。 5、碱水解法生产2′，3′-混合核苷酸 RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定，很容易生成2′，3-环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更不稳定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。 （二）发酵法生产核苷酸 1．发酵法生产肌苷酸（IMP） 2、发酵生产黄苷酸（XMP）及酶法转化成鸟苷酸 （三）半合成法制备核苷酸 由于发酵法生产核苷的产率很高，核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化，从核苷生成5′-核苷酸收率可达90%。 五 药用氨基酸 氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，蛋白质的生物功能与构成蛋白质的氨基酸的种类、数量、排列顺序及由其形成的空间构象有密切关系。 氨基酸通过体内转化而维持其动态平衡，若其动态平衡失调，则机体代谢紊乱，甚至引起病变。 氨基酸具有丰富的营养价值，能治疗多种疾病，氨基酸及其衍生物能够治疗消化道疾病、肝病、脑及神经系统疾病、肿瘤和其他与氨基酸有关的疾病。 氨基酸的生产方法 天然蛋白质水解法 发酵法 酶转化法 化学合成法 （一）水解法 以毛发、血粉及废蚕丝等蛋白质为原料，通过酸、碱或酶水解成多种氨基酸混合物，经分离纯化获得各种药用氨基酸的方法称为水解法 水解法生产氨基酸的主要过程为水解、分离和结晶精制三个步骤 （1）蛋白质的水解方法 酸水解法 碱水解法 酶水解法 水解法制备L-胱氨酸 （2)氨基酸的分离方法 溶解度法 利用溶解度差异 等电点法 特殊试剂沉淀法 与某些有机或无机试剂形成不溶性衍生物的分离方法 吸附法 利用吸附剂对不同氨基酸的吸附能力不同 离子交换法 利用离子交换剂对不同氨基酸的吸附能力差异 （3）氨基酸的精制方法 分离出的特定氨基酸中常含有少量的其他杂质，需进行精制。 结晶和重结晶技术 溶解度法 结晶与溶解度相结合的方法 （二）发酵法 发酵实质是是利用微生物细胞酶的作用，将培养基中的有机物转化为细胞或其他有机物的过程 发酵法的基本过程 发酵图示 （三）化学合成法 利用有机合成和化学工程结合的技术生产氨基酸的方法 1酶解法制备脱氧核苷酸 2 酶解法生产5’-单核苷酸工艺流程 用盐酸或硫酸回流煮沸 蛋白质经氢氧化钠或氢氧化钡水解 在一定的PH和温度条件下经蛋白质水解酶作用分解 培养基配制 灭菌 菌种诱变 菌种培养 6-氟色氨酸 Pseudomonas aureofaciens（金色假单胞菌） 吡咯叠氮（pyrrolnitrin） 三氟-DL-亮氨酸 S.typhi 亮氨酸 对氟苯丙