PCR技术浅析.pptx

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PCR技术浅析

分子生物学原理与方法;主要内容;聚合酶链式反应(PCR);PCR的基本原理;PCR反应过程 ;PCR反应过程 ;温度与时间;PCR 的反应体系;1、引物;引物设计的原则;实例:设计引物;;;;2、酶及其浓度;3、dNTP 的质量与浓度;4、模板DNA;5、Mg2+浓度;PCR扩增产物的分析方法;PCR产物电泳可能出现的问题; 阴性;假阳性;出现非特异性扩增带 ;出现片状拖带或涂抹带 ; 提高PCR扩增的特异性 升高退火温度 缩短延伸时间 降低引物和酶的浓度 适宜的Mg2+的浓度 引物设计的特异性 减少循环次数 ;核酸测序技术 ;与 PCR反应类似。 反应体系中包含:模板 DNA, Taq酶, dNTPs, ddNTPs和测序引物; 反应过程: 变性-复性-延伸-终止 ;Dideoxynucleotides(双脱氧核苷酸);荧光分析;序列分析;;;基因的构建;

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