基因工程的基本操作程序白齐.ppt

1.将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 （1）农杆菌转化法(常用) ①农杆菌： 植物的受伤组织会产生一些糖类和酚类物质吸引根瘤农杆菌向受伤组织集中 ，使植物形成肿瘤。 此糖类和酚类物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常不存在于单子叶植物中，农杆菌易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。 思考与探究：2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗? （1）农杆菌转化法 Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 ②原理： ③转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 （2）基因枪法 适用于单子叶植物 （3）花粉管通道法 适用于被子植物 我国科学家独创的一种方法,我国的转基因抗虫棉就是用这种方法获得的 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 滴加目的基因溶液 （3）花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） 受精卵具有体积大,易操作,经培养可直接表达性状的 优点。而动物体细胞的全能性受限。 （2）操作程序: 提纯含目的基因表达载体 受精卵 显微注射 移植到子宫 新性状动物 早期胚胎培养 2.将目的基因导入动物细胞 常用法： Ca2+处理细胞法 (Ca2+增加细菌细胞的通透性) 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 3.将目的基因导入微生物细胞 细菌能够吸收DNA的状态 1、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是 （ ） A．结构简单、操作方便 B．繁殖速度快 C．遗传物质含量少、简单 D．性状稳定、变异少 2、基因工程常用的受体细胞有（ ） ①大肠杆菌 ②枯草杆菌 ③支原体 ④动植物细胞 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．①②④ B D 3、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是( ) A.人工合成基因 B.目的基因与运载体结合 C.将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达 C 巩固训练 * 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 1. 目的基因主要是指：　_______________________ 编码蛋白质的结构基因 2. 获取目的基因的常用方法 （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 一、获取目的基因 ①概念： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库 （1）从基因文库中获取目的基因 提取某种生物的全部DNA 一定大小的许多DNA片段 重组DNA分子(携带目的基因) 限制酶 与载体连接 受体细胞(基因文库) 筛选出产生特定性状的受体细胞 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 ②种类 1.基因组文库: 2.部分基因文库（如cDNA文库） 基因文库中包含了一种生物的所有基因,这种基因文库叫做基因组文库 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库. 优点： 操作简单 缺点： 工作量大，盲目性强 ③从基因文库中获取目的基因 基因组文库与部分基因文库的关系 ？为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取可以吗？ 如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段等情况，往往就需要构建基因文库。 如果所需要的目的基因序列已知，可以通过PCR等方式获得，则不需要构建基因文库。 寻根问底 巩固训练 1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的（ ） A.染色体DNA?? B.线粒体DNA C.总mRNA?? D.tRNA 2、目的基因可从基因文库中获得，下列有关基因文库的描述正确的是（ ） A.某生物的全套基因就是一个基因文库 B.将含