应用高速逆流色谱分离罗布麻花中化学成分资料.pptVIP

这篇论文是在我的导师刘春明老师、王晶老师的多次指导下完成的。在这篇论文的写作过程中，王晶老师不辞辛劳，多次与我就论文中许多核心问题作深入细致地探讨，给我提出切实可行的指导性建议，并细心全面地修改了我的论文。 衷心感谢化学学院所有老师对我的栽培、支持和鼓励，感谢所有朋友的关心和帮助 * 作 者：薛丽 学 号：0819140236 指导教师：刘春明 王晶 长春师范学院化学学院 一、绪言 二、实验方法 三、结果分析与讨论 四、结论 五、致谢 1.1罗布麻花简介 罗布麻为夹竹桃科野生植物，花中含有种类和含量均十分丰富的黄酮类化合物，不仅在医疗上有十分广泛的应用，还有美容保健等功效。 1.2高速逆流色谱 一种新型现代色谱分离技术，基于液-液分配色谱原理，具有制备量大，样品无损耗，分离纯度高，重现性好，速度快等优点 2.1实验材料与仪器 2.1.1实验材料 罗布麻花药材采摘自新疆罗布泊地区，经长春师范学 院中心实验室张语迟鉴定； D101大孔树脂购自南开大学化工厂； 提取制备用乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯和正己 烷为分析纯试剂 (北京化工厂)； 色谱用乙腈、乙酸为分析纯试剂 (美国Fisher公司)； 超纯水为本研究部门自制 (18.2Ω Pa) ? Waters 2695高效液相色谱, 配备Waters 2998二极管阵列检测器 (美国Waters公司)；Agilent C18色谱柱(250mm×4.6 mm, 5 μm, 美国Agilent公司)； Finigan LCQTM 电喷雾质谱 (美国Thermo-Fisher Scientific公司)； DE MINI 型高速逆流色谱仪 (英国Dynamic Extractions公司)，内有两个制备性色谱柱，柱体积为135 mL；转速范围为0–2000 rpm； Sanorius BS l10S 分析天平 (十万分之一，北京赛多利斯有限公司)； 纯水器 (法国Millipore公司)； 0.45 μm滤膜 (美国Agilent公司)； 各组成溶剂 分液漏斗中摇匀，静止 分别取2 mL上相和下相 溶解少量样品粉末 分别取1 mL上下层溶液于不同试管 90 oC水浴加热挥发至干 1 mL色谱甲醇溶解 0.45μm微孔滤膜过滤 高效液相色谱检测 罗布麻花粉末 100.002 g 2000 mL 60%乙醇 溶液 200 mL水溶解上D-101型 大孔树脂柱 制得罗布麻花粗提物， 总黄酮 回流提取1h (3次) 合并滤液，浓缩至干 先用5倍柱体积的水洗脱 弃去 再用5倍柱体积的 60%乙醇溶液洗脱 收集并浓缩至干 2.2.3 溶剂系统的配制 按照乙酸乙酯―乙腈―水―乙酸为5: 3: 5: 0.05 (v:v:v:v)，分液漏斗中，摇匀，静止。下层溶液作为流动相，上层溶液作为固定相。 2.2.4逆流色谱实验参数的设置 固定相流速：10 mL/min 流动相流速：2.5 mL/min 柱体积：150 mL 进样量：150 mg 注入样品量：2 mL （从30 min时开始接流分） 检测波长：254 nm 转速：1400 rpm 柱温：30 oC 运行：180 min ? 二元线性梯度洗脱： 流动相A为0.2% 醋酸溶液，流动相B为乙腈，流动相梯度程序：0 - 15 min, 5% B， 15 - 60 min，5% - 40% B 流速:1.2 mL/min 样品进样量:10 μL 检测波长：254 nm 柱温: 28 oC ? 3.1 利用高效液相色谱筛选逆流色谱溶剂体系 图1： 罗布麻花总黄酮的制备型逆流色谱图 图2： 罗布麻花提取物的高效液相色谱图 提取物中含有13种化学成分，共有10个化合物通过高速逆流色谱洗脱下来. 图3：流分1的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为槲皮素–3–O–β–D–葡萄吡喃糖基(2→1)–O–β–D–葡萄吡喃糖苷 (白麻苷) 图4：流分2的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据， 证明该化合物为Kaempferol –7–O–β–D– glucopyranosyl(1→4)–β–D–glucopyranoside (山奈酚–7–O–β–D–吡喃葡萄糖基(1→4