动物细胞与组织培养详解.ppt

 动物细胞的特点及生长特性? 动物细胞大，无细胞壁 动物细胞生长缓慢，倍增时间长，易受污染 需氧量少，对机械搅拌或剪切力敏感 动物细胞间主要以聚集体形式存在 原代细胞一般繁殖50代即退化死亡 一些不同形状的人体细胞 血液凝块  树突细胞: 嗜中性粒细胞吞噬志贺杆菌 巨核细胞 骨细胞 成骨细胞 破骨细胞(紫色) 胶质细胞 正常衰老细胞 正常衰老细胞（红色）和死亡细胞 细胞凋亡的核变 癌症细胞 大片自由基和被其污染至病的细胞  细胞变异，增大的癌症细胞  乳腺癌细胞 脑部细胞癌变 由于营养过剩导致的细胞和由此导致死亡 病死的肌细胞 SEM of retina of eye showing rod cells (photoreceptors） 扫描电镜的眼睛显示视网膜视杆细胞 Scanning electron micrograph of a human sperm contacting a hamster egg.? 人上皮细胞培养7 d 小鼠胚胎成纤维细胞 体外培养的间充质干细胞 黑色素细胞 一、动物细胞与组织培养的基本概念 分类: 动物细胞培养： (Cell and Tissue Culture) 指的是从动物组织或细胞从体内取出，在模拟体内生理环境，无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 细胞培养(Cell Culture) 培养物是单个细胞和细胞群。 器官培养（Organ Culture） 培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。  Classification of Cell Cultures Primary Culture原代培养：直接取自动植体的组织或细胞的培养。 Secondary Culture传代培养：从原代培养的细胞的继续转接培养称为传代培养。 These cells have a limited number of divisions or passages. After the limit, they will undergo apoptosis.Apoptosis is programmed cell death 发展历史 动物细胞组织培养的奠基人是美国生物学家哈里森，1907年盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法。 1923年，法国学者卡勒尔（Carrel）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织生存空间。 1951年， 厄尔 （Earle） 发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。 卡瑞尔把无菌技术带到组织培养中。 动物细胞培养的应用 a.生物制品的生产b.转基因动物的培养c.检测有毒物质d.医学研究 二、 动物细胞体外培养生长特性 （一 ）贴附型细胞 （1）成纤维细胞型细胞： （2）上皮型细胞: （3）游走型细胞 （4）多形型细胞 （二）非贴附型细胞 (悬浮型) 但有些细胞既可贴附生长，也可悬浮生长。 贴附型细胞 贴附生长是大多数细胞在体内生长的基本存在方式。贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。 如羊水细胞为贴附型细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞生长。 　 （1）成纤维型细胞： 长梭形或不规则，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵园形核，胞质向外伸出2-3个长短不同的突起，生长时呈放射状、漩涡状走向。 成纤维型细胞　　在培养中的细胞凡形态与成纤维细胞类似时，皆可称之为成纤维细胞。本型细胞由形态与体内成纤维细胞的形态相似而得名. 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间质起源的组织细胞常呈本类形态生长。 人胚肺细胞在显微镜下呈现为典型的成纤维细胞型。 （2）上皮型细胞: 此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平状， 细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时彼此紧密连接成单层细胞。 生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。Hela细胞呈现为典型的上皮细胞型。　　　 主动脉血管内皮细胞（ 100 倍） （3）游走型细胞 本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动，速度快且不规则。 此型细胞不很稳定，有时亦难和其它型细胞区别。在一定的条件下，由于细胞密度增大联成片后，可呈类似多角型或成纤维细胞形态。 体外培养的游走型细胞具有类似巨噬细胞样的特征。主要是：单核巨噬细胞系统的细胞，淋巴细胞，肿瘤细胞。 （4）多形型细胞 形态上不规则的细胞，一般分胞体和