2离子交柱层析分离纯化蔗糖酶.pptVIP

* * 实验二 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 一、实验目的和要求 1、学习离子交换层析的基本原理； 2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术； 3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。 二、实验基本原理 1、离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC） 离子交换层析是常用的层析方法之一。它是以离子交换剂为固定相，根据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。离子交换剂与流动相中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。这些过程都是可逆的。在某一pH值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。当洗脱液的pH改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。 离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。 基质 电荷基团 反离子 阳离子交换剂 电荷基团 反离子 阴离子交换剂 电荷基团 反离子 基质 基质 — ＋ — ＋ — ＋ 溶液中的离子 或离子化合物 溶液中的离子 或离子化合物 可逆交换 可逆交换 ＋ — ＋ — （交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖) 2、酶活力检