氨基酸的定量测定资料.ppt

2、色氨酸的测定 原理 ： 样品中的蛋白质经碱水解后，游离的色氨酸与甲醛和含铁离子的三氯乙酸溶液作用，生 成哈尔满化合物（norharman），具有特征荧光值，可以进行定量测定。 试剂： (1)0.3mmol/L 三氯化铁-三氯乙酸溶液：称取三氯化铁(FeCl3?6H2O)41mg，加入10%三氯乙酸溶液溶解并定容至500mL。 (2)2%甲醛：量取甲醛溶液(36%～38%)5.5mL，加水至100mL。 (3)色氨酸标准溶液：称取10mg色氨酸，用0.1mol/LNaOH 溶液溶解并定容至100mL, 置棕色瓶中备用,使用时用水稀释成1mg/L的标准溶液 2、色氨酸的测定 操作方法： 称取样品粉末100～200mg于离心管中，加入4mL乙醚,摇匀后过夜，以3000r/min速度离心。将乙醚提取液移入试管内,并用乙醚洗涤残渣3次，收集乙醚液于试管中，于40℃水浴除去醚。残留物中加入6.25mol/L NaOH4mL，火焰封口，于110℃水解16～24h。水 解液用4mol/L HCl 溶液调节至pH6～8 后,用水定容至50mL,过滤备用。 吸取滤液0.2mL，加入2%甲醛0.2mL和0.3mmol/L三氯化铁-三氯乙酸混合液2mL，摇匀后于100℃水浴中加热1h，取出，冷却后用水定容至10mL。在激发波长为365nm，发射波长449nm条件下，测定样品的荧