流式细胞术原理及应用讲述.ppt

什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠 为什么要进行补偿调节？ 520 400 500 600 700 575 665 FITC PE PC5 laser D、 单标对照 Single Staining Control 补偿调节方法： FL-1(FITC) FL-2(PE) FL-1(FITC) FL-2(PE) FL2 - %FL1 FL-1(FITC) FL-2(-) FL-1(-) FL-2(PE) FL1 - %FL2 Before Compensation After Compensation FITC 单标 PE 单标 什么样的补偿最合适？ 单染管的阴性群体和阳性群体在所需调节通道的荧光Median值相等时为最合适的补偿。 Uncompensated Compensated FL1-FITC stain FL2-no stain FL1-FITC stain PE-Medianneg PE-Medianpos PE-Medianneg= PE-Medianpos PE-Medianneg PE-Medianpos FL1-FITC stain Overcompensated 准确补偿的重要性 补偿调节要合适 未补偿 正确补偿 FITC-PE补偿太大 PE-FITC补偿太大 使用单种荧光素标记的单克隆抗体和其余荧光素对应的同型对照抗体分别染色 n色分析就