66动物染色体工程-细胞工程课程.ppt

分（离目的基因） 切（割目的基因和载体） 接（连目的基因和载体） 转（化宿主细胞） 筛（选阳性克隆） 表（达目的基因） 基 本 模 式 * 目的基因 基因载体 重组体 分 切 接 转 筛 表 总体技术路线 * 操作步骤 * * 用酵母人工染色体克隆基因时，尚存在三个问题： ⑴ 会发生嵌合体现象，即同一个酵母人工染色体中会有两个不相连的DNA片段； ⑵克隆的基因不稳定，易发生缺失现象； ⑶不能用简单的方法将人工染色体与酵母染色体分开。 1983年，美国科学家构建成功了酵母人工染色体(YAC)，他们从酵母基因组中分离到了着丝粒、自主复制序列及一些标记基因，又从四膜虫的大核rDNA的末端分离到了端粒，然后将这三部分及标记基因连在一起就构成了酵母人工染色体。 * 2、细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC） 优点： 稳定遗传； 其转化宿主为重组缺陷型菌株， 避免了嵌合现象； 采用电击法，转化效率极高； * MAC则是以哺乳动物细胞作为宿主细胞的人工染色体技术，作为异源DNA片段的载体，比YAC容量大。 哺乳类人工染色体（MAC）比YAC大2～3倍。人类人工染色体（HAC）可用作基因治疗。 MAC的优点：能容纳更大的基因，维持基因的拷贝数，没有副作用，能长期调控基因表达。 3、哺乳类人工染色体（MAC） * 人工染色体的应用 基因组物理图谱的构建 基因的图位克隆 基因组测序 转基因研究 * * 染色体结构变异 易位：一个染色体上某一区段跟另一非同源染色体上的区段发生互换 缺失：染色体的某一区段及带有的基因一起丢失 倒位：染色体上某一区段连同它带有的基因顺序发生180度倒转 重复：一个染色体上增加了相同的某个区段。 * 染色体结构变异 染色体易位：一个染色体上某一区段与另一非同源染色体上的区段发生互换。 染色体缺失：染色体的某一区段及其带有的基因一起丢失 染色体倒位：染色体上某一区段连同它带有的基因顺序发生180度倒转。 染色体重复：一个染色体上增加了相同的某个区段。 * 缺失：缺失一个片段。 重复：某一片断重复出现。 倒位：片段断裂，倒转180度，重新连接。 易位：片段断裂，移到另一条染色体臂上。 * Animal Chromosome Engineering ◆ 认识染色体与染色体组 ◆ 什么是染色体工程 ◆ 动物染色体工程的主要内容 染色体组工程 个别染色体工程 人工染色体 * （一）动物染色体倍性改造 1、动物的多倍体育种 自然界中存在多倍体动物吗？ 人工诱导多倍体有什么意义？ 诱导方法 倍性鉴定 2、动物的单倍体育种 后代是单倍体吗？ * 1、人工诱导多倍体 ◆ 人工诱导多倍体的意义 ◆ 人工诱导多倍体的途径 ◆ 人工诱导多倍体的方法 ◆ 多倍体性鉴定方法 * （1）人工诱导多倍体的意义 多倍体(polyploidy): 多倍体动物如两栖类、鱼类、贝类都具有良好的生存力和生长率 水产养殖 增强抗病能力、提高生长速度 * * 特点 多倍体与二倍体相比，最显著的特点是形态上的巨大性。 糖类、蛋白质及其它产物的含量也有所提高。 由于多倍体动物具有生长速度快、成活率高及抗病能力强等特点，所以可通过人工诱导多倍体来改善生物的经济性状。 * （2）人工诱导多倍体的途径 其一：原种或杂种所形成染色体未减数的配子受精而产生的。 （自然形成途径） 其二：原种或杂种的合子或体细胞染色体数目加倍而成的。 （人工诱导途径） * （3）人工诱导多倍体的方法 ◆ 生物学方法 ◆ 物理学方法 ◆ 化学方法 * ◆ 生物学方法 动物通过杂交方法尤其是种间杂交获得异源多倍体。种间杂交导致第二极体不排出。 草鱼♀ × ♂三角鲂 (2n=48) ( 2n =48) 草鲂杂种 (3n=72) 动物的卵原细胞减数第一次分裂结束形成的两个子细胞中的大细胞叫次级卵母细胞，小的叫第一极体（1个）；减数第二次分裂完形成的4个子细胞中那1个大细胞叫卵细胞，3个小的叫第二极体（3个）。 * ◆物理学方法（1） A、 温度休克法 原理：引起细胞内酶构型的变化，不利于酶促反应的进行，导致细胞分裂时形成纺缍丝所需的ATP供应受阻。抑制第二极体的释放，诱导