Chapter3核酸化学课程.ppt

?三股螺旋DNA K. Hoogsteen 1963 通常是一条同型寡核苷酸与寡嘧啶核苷酸-寡嘌呤核苷酸双螺旋的大沟结合： oligo(Py) : oligo(Pu)—oligo(Py/Pu) 第一股是寡嘧啶，中间是寡嘌呤，第三股可以是寡嘧啶或寡嘌呤 第三股与寡嘌呤之间同向平行，并按Hoogsteen配对。 T= A : A , C≡G ： C+ T = A : T C≡G ： G DNA的存在形式 二、DNA的三级结构 DNA三级结构：指DNA双螺旋的进一步扭曲与折叠形成的特定构象，包括三方面内容（P490） 　原核 双链环状DNA（dcDNA） 病毒 单链环状DNA（scDNA） 单链线性DNA（ssDNA） 负超螺旋 几个参数： 连环数：指双链的互绕数，L（linking number） 扭转数：指螺旋圈数，T（twisting number） 超螺旋数：即缠绕数，W（writhing number） L = T + W 拓扑异构酶：I（L0＋1）、II（ L0-2 ） 真核 双链线性DNA（dsDNA）：P495 核小体 　　 纤丝 　　 突环 　　 玫瑰花环 　　 螺旋圈 　　 染色体 第四节 RNA的结构与功能 一、结构特点 碱基组成 A、G、C、U （A＝U/G≡C） 稀有碱基较多，稳定性较差，易水解 多为单链结构，少数局部形成螺旋 分子较小 分类 mRNA（hnRNA 核不均一RNA） tRNA rRNA （snRNA/asRNA） 少数RNA病毒 二、tRNA 占RNA总量的15％ 一种氨基酸对应最少一种tRNA 分子量25000左右，大约由70－90个核苷酸组成。 分子中含有较多的修饰成分。 3‘-末端都具有CpCpAOH的结构。 三叶草形（二级结构）：1个臂、4个环 tRNA的三级结构 三、rRNA 占RNA总量的80％ 原核生物 真核生物 核糖体 rRNA 核糖体 rRNA 30s 70s 50s 16s 5s 、23s 40s 80s 60s 18s(17S) 5s、5.8s、28s(26S) 四、mRNA和hnRNA 占细胞总RNA的3％～5％ 真核细胞mRNA的3‘-末端有一段长达200个核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA)，称为 “尾结构” ，5’ -末端有一个甲基化的鸟苷酸，称为 “帽结构 ” 。P484 五、snRNA （small nucleic RNA 核小RNA） scRNA （small cytoplasmic RNA） asRNA （antisense RNA） 第五节 核酸的性质 一、一般的理化性质 两性解离 / 一般呈酸性（在中性溶液中带负电荷），可 溶于水，不溶于有机溶剂 线性大分子（粘度高、抗剪切力差） 可用电泳或离子交换（色谱）进行分离 室温条件下，DNA在碱液中变性，但不水解，RNA水解 加热条件下，D－核糖＋浓盐酸＋苔黑酚 绿色 D－2－脱氧核糖＋酸＋二苯胺 蓝紫色 二、核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。 以A260/A280进行定性、定量 DNA和RNA溶液中加入溴化乙锭（EB），在紫外下发出荧光 三、核酸的变性、复性与分子杂交 1. 变性 稳定核酸双螺旋次级键断裂，空间结构破坏，变成单链结构的过程。核酸的一级结构(碱基顺序)保持不变。 变性表征 生物活性部分丧失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效应） 变性因素 pH（11.3或5.0） 变性剂（脲、甲酰胺、甲醛） 低离子强度 加热 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将加热变性使DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称熔解温度或熔点，用Tm表示。 一般DNA的Tm值在82-95?C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关，也与DNA的均一性和介质中离子强度有关。 G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G, C含量，可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 2. 热变性和Tm 3. 核酸的复性 变性核酸的互补链在适当的条件下，重新缔合成为双螺旋结构的过程称为复性。 DNA复性后，一系列性质