第六原生质体培养和体细胞杂交摘要.pptxVIP

第六章 原生质体培养和体细胞杂交;三个问题;什么是植物原生质体？;原生质体;第一节 原生质体的分离与纯化;二、材料的预处理 (1)暗处理 在分离原生质体前,将在温室内生长5-7周的豌豆枝条取下后,置于维持一定湿度的暗室中预培养1-2天。获得的原生质体存活率较高,并能继续分裂。 (2)预培养 把羽衣甘蓝叶撕去下表皮，置于又到愈伤组织的培养基上预培养7天，然后再用酶液脱壁。 得到的原生质体量虽低于未经处理的对照组，但培养时分裂频率提高，并很快形成能生根的愈伤组织;(3)预萎蔫 将叶片置于日光或灯光下2-8h使叶片稍萎蔫，则有利于撕除下表皮和酶解叶肉细胞壁分离原生质体。 (4)预质壁分离 把材料先放到与酶溶液中糖浓度相同的糖溶液中预培养1h左右，是细胞质壁分离，然后再放入酶液去壁。加快原生质体的释放，提高原生质体的活力。 ;三、分离方法;（二）酶解分离法： 指将材料放入能降解细胞壁的混合等渗酶液中保温一定时间，在酶液的作用下，细胞壁被降解，从而获得大量有活力的原生质体的方法。 常用的酶种类：纤维素酶类（纤维素酶、半纤维素酶、崩溃酶[Driselase]）、果胶酶类（果胶酶和离析酶[Macerozyme]）、蜗牛酶和胼胝质酶。;酶解分离法 优点：获得量大，适用广泛。 缺点：商品酶制剂均含有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶以及酚类物