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第十一章 DNA序列测定和分析 一、加减法测序 加减法测序 加减法测序 二、双脱氧链终止法 双脱氧链终止法测序原理 Sanger双脱氧链终止法测序 双脱氧链终止法测序注意事项 M13作载体的Sanger测序过程 双向测序示意图一 双向测序示意图二 双脱氧链激光荧光法 自动化测序的输出信号 三、Maxam-Gilbert 化学直读法 Maxam-Gilbert 化学直读法 Maxam-Gilbert 法测序 Maxam-Gilbert 化学直读法的反应 Maxam-Gilbert 法测序原理 A C 的反应 四、测序策略 鸟枪法 引物步移法 引物步移法 五、第二代测序技术 1. Roche（454）GS FLX sequencer （1）构建测序文库 （2）乳滴PCR （2）乳滴PCR （3）PicoTiterPlate载样 （4）测序 焦磷酸测序反应 焦磷酸测序反应 GS FLX系统的特点 2. Solexa Sequencer （1）样品制备、附着、桥型扩增 桥型扩增成簇 （2）合成测序 测序反应 （3）结果分析 测序时加的第一类核苷酸 测序时加的第二类核苷酸 Solexa技术的特点 3. SOLiD sequencer 边连接边测序法 （1）制备DNA片段文库 制备mate pair文库 制备mate pair文库 （2）乳滴PCR 磁珠固定 （3）边连接边测序 第一轮连