第四章-蛋白质共价结构讲课.ppt

主要凝血因子因子 I， 纤维蛋白原 因子 II, 凝血素 因子 III, 凝血酶原酶因子 IV, 钙( Ca2+ ) 因子因子 V, 促凝血球蛋白原，易变因子 因子 VII, 转变加速因子前体，促凝血酶原激 酶原，辅助促凝血酶原激酶 因子 VIII, 抗血友病球蛋白A (AHG A), 抗血 友病因子A （AHFA),血小板辅助因子 I, 血友病 因子 VIII 或 A 因子 IX, 抗血友病球蛋白B (AHG B)，抗血友病因子B (AHF B)，血友病因子 IX 或 B 因子 X, STUART(-PROWER)-F, 自体凝血酶原C 因子 XI, ROSENTHAL因子，抗血友病球蛋白C 因子 XII, HAGEMAN因子， 表面因子 因子 XIII, 血纤维稳定因子 辅助凝血因子FITZGERALD因子 FLETCHER因子 (激肽释放酶原) von-Willebrand-因子  Arg274— Thr275 凝血酶原激酶 （Ⅹａ） Arg323— Ile324 凝血酶专业位点: Arg-Gly 血纤蛋白原 血纤蛋白 凝血酶切点 血纤肽A、16AA 血纤肽B、14AA 血纤蛋白原为糖蛋白、分子量340kD，由6条多肽链组成，29对二硫键交联成网状分子。 N端 C端 多净负电荷 血纤蛋白分子长46nm, 血纤蛋白凝块重复周期 为23nm 转谷氨酰胺酶催化 溶血系统 纤溶酶原：单链糖蛋白、92kD、790AA。 纤溶酶原激活剂（PA）： t-PA和u-PA 五、肽和蛋白质的人工合成 1965年，中国科学院生物化学研究所、有机化学研究所和北京大学相互协作，在世界上首次人工合成了结晶牛胰岛素。 多肽的人工合成就是将不同的氨基酸按照一定顺序经接肽反应控制合成多肽链的过程。 实现控制合成的难点： （1）进行接肽反应之前必须将不应参加接肽的功能团加以封闭或保护，以免与接肽试剂发生作用而生成不需要的肽键或其他键； （2）一个氨基酸的α-NH2与另一个氨基酸的α-COOH之间不会自发形成肽键，必须将这两个基团中的一个进行活化。 1、保护基：接肽时能起保护作用，接肽后又能容易除去。 苄氧甲酰氯（Cbz-Cl）: 对甲苯磺酰氯(Tos-Cl) : 叔丁氧甲酰氯(Boc-Cl): 氨基保护基Y：Cbz、Tos、Boc 羧基保护基Z： 乙酯（OEt） C2H5O- 苄酯（OBzl） 叔丁酯（OBut） 甲酯（OMe） CH3O- 侧链活泼基团保护基 Cys-SH：对甲氧苄基（MBzl） 苄基（Bzl） Cys-SH、Ser-OH、Thr-OH、Tyr-OH： 脱去氨基保护基的方法： Boc用酸，如50%三氟醋酸脱去 Tos用钠氨还原法 脱去羧基保护基的方法： 苄酯（OBzl）用催化加氢法 叔丁酯（OBut）用酸，如50%三氟醋酸脱去 Cbz用催化加氢法 甲酯或乙酯用皂化法 对甲氧苄基（MBzl）：在液态氟化氢中于0℃处理30 min即可切除。 苄基（Bzl）用Na-液NH3处理可以除去 。 2、将参与肽键合成的羧基和氨基活化 氨基的活化： 接肽时加入有机碱如三乙胺或KHCO3等，保证氨基处于自由状态，氨基即活化。 羧基的活化: 早期用酰氯，但反应太激烈，后来采用叠氮法，现在用了最多的是活化酯法和混合酸酐法。 （A）叠氮法 （B）活化酯法 （C）混合酸酐法 3、合成方法 （1）液相合成法 缩合剂：N，N′-二环己基碳二亚胺（N，N′-dicyclohexyl carbodiimide，缩写DCCI或DCC） 在接肽反应中，DCC从两个氨基酸残基中夺取一分子水，自身转变为不溶的N,N’-二环己基脲从反应液中沉淀出来，容易过滤除去。DCC实际上是一种活化酯法，其缩合反应的中间物可看成是活化酯。 （2）固相合成法 * This classification is based primarily on structure but also maps to function but loosely viz: Most “structural” proteins are fibrous Most but not all enzymes are globular Ion channels are membranous 溴化氰基锍 甲基硫氰酸 肽酰高丝氨酸内酯 溴化亚氨内酯 2）羟胺断裂：羟胺（NH2OH）在pH9下能专一性地断裂Asn-Gly之间肽键。但专一性不很强，Asn-Leu及Asn-Ala键也能部分裂解。反应式如下： 酶解方法： 用于肽链断裂的蛋白水解酶是一种肽链 内切酶或叫内肽酶（endopeptidase）。 常用的有胰蛋白酶、胰