凋亡检测实验分析.pptVIP

凋亡检测 ——DNA LADDER—— 主 要 内 容 DNA Ladder 实验 实验原理 实验材料及试剂 实验步骤及结果 实验原理 细胞凋亡过程中,可发生特异性级联生化反应,其中最具特色的是内源性核酸内切酶的激活. 此酶可作用于连接DNA的核小体间区域, DNA链被切割成180~200bp或其整倍数的片断. 抽提DNA, 经琼脂糖电泳可见梯状电泳图谱 endonuclease Gel electrophoresis 700 520 360 180 Base pairs Distance between cuts = mutiple of 180 bps 180 bps Apoptotic DNA Ladder Lane 1: Marker Lane 2: negative control Lane 3: DNA of apoptotic cells Lane 4: DNA of necrosis cells 金标准 实验步骤 获取凋亡细胞 抽提DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验步骤 取16g大小的小白鼠, 外科手术取胸腺 少许洗去血迹 放入研磨器中(160目)研磨, 边磨边加1640液, 获取单个胸腺细胞.将所得混悬液倒入三角烧杯, 加入120ml 1640液(一般一只小白鼠可获2x106/ml 细胞) 每孔加入1.2ml DEX(5mg/ml)混