在细胞毒T细胞产生中嗜金属的巨噬细胞和 CD8.docVIP

在细胞毒T细胞的产生中嗜金属的巨噬细胞和 CD8 +树突细胞的有效合作  脾脏是对血源性病原体诱导产生免疫反应的淋巴器官。在脾边际区中的专门的巨噬细胞有战略性地定位用于对病原体和细胞碎片的吞噬,但不认为在T细胞反应的活化中起作用。这里我们论证,脾边际嗜金属性巨噬细胞(MMM)在树突状细胞对血源性病原体的交叉-呈递中必不可少。我们的资料表明,以MMM为靶向的抗原以及血源性腺病毒可以有效被MMM捕获并专门转移到脾CD8 + DCs进行交叉呈递以及细胞毒T淋巴细胞的激活。边缘区中巨噬细胞的损耗阻止CD8 + DCs对细胞毒T淋巴细胞的激活。此外,我们发现以MMM为靶向肿瘤抗原作为抗肿瘤免疫治疗是非常有效的。我们的研究指出脾MMM在CD8 + T细胞免疫初始阶段起到一个重要角色，捕获和集合血源性抗原并转移到进行交叉呈递的DCs,这可以被用于设计免疫接种策略来诱导抗肿瘤细胞毒T细胞免疫. 脾对血源性抗原诱导免疫反应是必需的并且有独特的体系结构。动脉血流终止于边缘窦，边缘窦位于边缘区(MZ)，该区在含有B细胞淋巴结核T细胞区的白髓周围。边缘窦通过网状细胞连接并包含边缘区B细胞和两种类型的巨噬细胞(Mφ)(1,2)。边缘的嗜金属性巨噬细胞(MMM),其特点通过唾液酸结合的Ig样凝集素-1(小鼠唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-1,唾液酸粘附素,CD169)表达(3，4）,是作为个紧密的网络位于白髓附近的MZ的中心部位,而边缘区巨噬细胞(MZM),特定地表达C型凝集素SIGN-R1 ,可以被发现在外部的MZ接近红髓(5)。MZM和MMM的一个亚群都表达I型清除剂受体MARCO(6)。 虽然目前在血液中MMM和MZM有效地着手处理微粒抗原(Ag),但它们目前为止被认为对T细胞反应的发生并不重要(8 - 10)。 相对于Mφ,树突细胞(DCs)是专门的Ag呈递细胞，在引发主要Tcell反应中占据主导地位。鼠脾DCs根据表型标记的表达可分为两不同亚:定位和执行机能(11)。CD8 + DCs表达C型凝集素DEC205并被发现在T细胞区和外层边缘区(12)。他们是专门从事Ag的交叉呈递和活化以及细胞毒T细胞（CTLs)的免疫耐受作用(13)。 此外,他们对抗肿瘤特异性免疫反应的生产以及体内肿瘤的清除是非常重要的(17)。相反,CD8?DCs专门从事CD4 + T细胞的激活。CD8?DCs主要位于边缘区并选择性地表达C型凝集素DCIR2 。在激活时,所有DC亚群迁移到T细胞区(18)。 在本研究中,我们已经研究了脾Mφ在CTL反应的激活中的作用。我们足以证明Ag到进行交叉呈递的CD8 + DCs的转移以及在Ag靶向作用于边缘嗜金属性巨噬细胞后诱导强烈的细胞毒T细胞反应。此外,MMM被证明含有腺病毒-编码的Ag并在静脉注射腺病毒的疫苗后对CTL反应的产生必不可少。我们的资料显示,凭借进行交叉呈递的CD8 + DCs，利用MMM有效的Ag-集合能力，MMM和DCs间的生理合作。 这个过程可以用于目标策略来诱导抗肿瘤CTL反应。 结果 Ag对MMM的靶向作用导致有效的CD8 + T细胞激活。为研究脾Mφ在Ag呈递和T细胞活化中的作用,我们共价结合了OVA Ag成为各种单克隆抗体(mAb),专门对脾脏中不同的Mφ亚群进行靶向作用。这是用一个单克隆抗体实现的，小鼠唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-1（Siglec-1）（只通过MMM表达）,清除剂受体MARCO（在边缘区巨噬细胞MZM上和MMM的一个亚群上强烈呈递）,F4/80（通过脾髓Mφ表达）,和SIGN-R1（通过MZM特定表达）。含有这些mAb的脾冻干切片染色法证实MMM和MZM上特定的表达模式(图,S1A),静脉注射抗体-OVA显示了它与确切Mφ亚群的具体结合(图，S1B)。 为研究特定靶向是否会导致CD8 + T细胞活化的不同,mAb-OVA复合物连同激活的αCD40 mAb静脉注射。免疫后7天，脾细胞在体外用H-2Kb OVA257–264抗原决定簇再次被激活并了对细胞内IFNγ产量进行测量作为OVA-特定的 CD8 + T细胞诱导的一个量度。用指导Siglec-1和MARCO的OVA轭合物靶向MMM的Ag导致了大量CD8 + T细胞生产的IFNγ，但是在体内，用无关对照mAb免疫不能激活CD8 + T细胞(图1A)。通过SIGN-R1靶向MZM或通过F4/80靶向红髓Mφ导致较低的CD8 + T细胞反应，与无关对照mAb无显著不同(图1A)。 对Ag通过与不同的Ab结合靶向不同Mφ亚群的效率的直接比较存在一些局限性。用能够显示亲和力和运输行为差异的Ab靶向不同表面受体，由于与Ag化学结合这可能进一步被改良,这些差别可以潜